【摘 要】
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目的:通过γ射线与人类单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因联合治疗Lewis肺癌的体内外实验研究,比较γ射线、HSV-tk基因治疗以及联合作用条件下,对体外培养的鼠源性Lewis肺癌
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目的:通过γ射线与人类单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因联合治疗Lewis肺癌的体内外实验研究,比较γ射线、HSV-tk基因治疗以及联合作用条件下,对体外培养的鼠源性Lewis肺癌细胞的杀伤能力和对小鼠局部移植瘤和转移瘤的治疗作用,探讨联合作用在治疗中的意义及其机制,以期为临床肿瘤治疗探索一条新的治疗途径.方法:体外实验:以脂质体介导法将含有HSV-tk基因的LXpsp-Hytk质粒和空载体LXSH质粒转入Lewis肺癌细胞内,用潮霉素B筛选阳性克隆,建立稳定表达的细胞株.RT-PCR检测HSV-tk基因在mRNA水平上的表达.细胞计数法绘制细胞生长曲线.Hoechest33258/PI荧光双染和流式细胞术亚二倍体细胞检测法测定细胞凋亡.流式细胞术检测细胞周期改变.以细胞克隆计数法检测各细胞株在不同剂量γ射线照射后的存活分数,绘制存活曲线,比较其辐射敏感性变化,以不同比例的HSV-tk基因转染细胞与亲本细胞混合培养观察旁观者效应:通过观察经不同方法处理的细胞培养液的杀伤效应探讨旁观者效应可能的产生机制.体内实验:C57BL/6小鼠皮下接种和尾静脉注射Lewis肺癌细胞建立局部移植瘤和肺转移瘤模型.瘤内注射法进行脂质体介导HSV-tk基因的转染,RT-PCR检测肿瘤组织内HSV-tk基因在mRNA水平上的表达.荷瘤小鼠分别进行基因治疗、γ射线照射或联合治疗,每3天一次,连续测量局部肿瘤直径、计算肿瘤体积并观察生存期.肺转移模型小鼠于接种后2周,处死取肺计数不同治疗组小鼠肺表面肉眼可见转移肿瘤结节数目.流式细胞术检测外周血CD4<+>和CD8<+>T淋巴细胞的百分比.免疫荧光法检测肿瘤浸润CD4<+>和CD8<+>淋巴细胞,同时做病理切片观察各组局部肿瘤和肺转移瘤组织的病理改变.实验结果用SPSSl0.0统计软件进行统计学处理.
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