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硫酸乙酰肝素3-氧-磺基转移酶V（3-OST-V）是生物酶法合成活性低分子肝素过程中的关键酶之一。作为一种双功能酶，它可以催化生成具有抗凝血活性的硫酸乙酰肝素，也可以催化生成能与I型单胞疱疹病毒糖蛋白D结合的多糖。本研究对生物合成活性肝素过程中的关键酶3-OST-V在大肠杆菌中进行了异源表达，对其诱导表达条件进行了优化，并对表达产物进行了纯化及酶学性质的初步研究，结果如下：通过PCR方法获得目的基因后，选用大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌和pET15b表达载体构建重组大肠杆菌BL21/pET15b/3-OST-V，并诱导表达得到重组蛋白3-OST-V，经SDS-PAGE检测目标蛋白的大小约为31kDa，经检测粗酶液的酶活力为0.11U/mg，表明成功表达了外源蛋白——硫酸乙酰肝素3-OST-V。对重组菌BL21/pET15b/3-OST-V诱导表达过程中的各单因素条件进行了优化，并进行了正交试验。结果表明：在以LB培养基为发酵培养基时，装液量为100mL，诱导表达时起始OD600为1.3，诱导剂IPTG终浓度为0.2mmol/L，诱导温度为20℃的条件下，诱导表达6h，重组蛋白3-OST-V粗酶液的酶活力提高到42.17U/mL。通过亲和层析法纯化重组蛋白3-OST-V，经测定纯化后的电泳纯产物比酶活达到0.58U/mg，较粗酶液的比酶活提高5.27倍，回收率为80.4%。在此基础上，对纯化后的3-OST-V的酶学性质进行了初步研究。结果表明3-OST-V酶促反应的最适温度为35℃，温度在40℃以下时，酶的温度稳定性较好。3-OST-V酶促反应的最适pH为7.0，且在pH7.0pH9.0条件下稳定性较好。在反应液中加入终浓度为1mmol/L的K+、Ca2+、Ba2+对酶促反应有一定的促进作用。综合AST-IV和3-OST-V酶学性质的研究结果，确定偶联测定3-OST-V活性的反应体系为：pH7.0，反应温度30℃，终浓度为1mmol/L的Ca2+、Ba2+。综上，本研究对生物合成活性肝素过程中的一个关键酶3-OST-V进行了异源表达，对其诱导表达条件进行了优化，并对表达产物进行了纯化及酶学性质的初步研究，为其大量生产奠定了一定的基础，从而为规模化合成人工硫酸乙酰肝素提供必须的工具酶，并为人工合成硫酸乙酰肝素的反应体系奠定一定的基础。