在丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei)中发现一种对植物细胞壁有膨松作用的蛋白,这种蛋白可以诱导失活细胞壁进行伸展,它与植物膨胀素相类似,具有能够膨胀棉花纤维和使滤纸强度降低的作用,所以被命名为swollenin (swol)。 Swollienin能够协同纤维素酶降解纤维素,提高纤维素酶的作用效率,使滤纸结晶纤维素并使其结构疏松,在工业生产中具有重要的应用前景。本实验以里氏木霉(Trichoderma reesei) QM9414菌株作为基因供体,黑曲霉CICC2462为受体菌,对膨胀素基因(swol)进行克隆,构建pSZHGS-swol黑曲霉表达载体,采用根癌农杆菌介导法进行黑曲霉的遗传转化,以实现swollenin基因在黑曲霉中的高效表达,作用纤维素材料与纤维素酶协同降解,从而为swollenin基因在工业化的生产上探索出了一条新途径。以下为本论文的主要研究结果：1. pSZHGS-swol表达载体的构建以里氏木霉(Trichoderma reesei)菌株作为基因供体,采用PCR扩增方法,克隆获得膨胀素基因swol,将连接T载体的swol基因质粒与表达载体pSZHGS分别用Nhe Ⅰ、HindⅢ双酶切并连接,构建黑曲霉表达载体pSZHGS-swol。2.swo1基因的黑曲霉转化子及同源重组转化子的筛选将黑曲霉表达载体pSZHGS-swol通过冻融法转化到农杆菌AGL1中,并采用根癌农杆菌介导法对黑曲霉CICC2462进行遗传转化。共对16株抗性菌落进行PCR检测,有4株菌落可扩增出约3742bp的目的条带,为阳性转化子,swol基因转化的阳性率为25%。利用同源重组引物对筛选出的4株阳性菌株做PCR鉴定,结果有3株可以扩增出大约1701bp的目的条带,表明这3株菌株为同源重组转化子,pSZHGS-swol转化同源重组率为75%。3.膨胀素蛋白对滤纸的崩解实验将筛选出的同源重组菌株进行液体发酵,取处理过的发酵液上清协同纤维素酶对滤纸进行崩解实验。结果表明,重组pSZHGS-swol菌株的发酵液上清能够协同纤维素酶降解滤纸纤维,使其更加膨松并且有明显的崩解效果,即该蛋白具有明显的膨松滤纸纤维的作用。