裂殖酵母ING家族蛋白Png1p在DNA损伤应答过程中的功能研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang55420
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究分为二部分:  第一部分、裂殖酵母ING家族蛋白Png1p在DNA损伤应答过程中的功能研究  ING家族蛋白(Inhibitor of Growth)作为一类肿瘤生长抑制因子,在几乎所有的真核细胞中都含有保守的同源蛋白,并广泛参与细胞凋亡,衰老,细胞周期调控,DNA损伤应答,细胞分化,肿瘤生长,激素信号传递,基因表达和染色质重构等多种过程。对ING家族蛋白参与DNA损伤修复的过程已经进行了许多的研究,但是由于ING家族蛋白参与DNA损伤修复的分子机制比较复杂,对于ING家族蛋白在DNA损伤信号传导通路上发挥的具体功能至今还未能完全有效解析。  裂殖酵母细胞含有两个ING家族蛋白:Pnglp和Png2p。至今为止,在裂殖酵母细胞中还没有关于ING家族蛋白参与DNA损伤应答的报道。同源进化分析表明:Pnglp和Png2p虽然同属ING家族,但两者位于系统发生树的不同分支上。进一步,我们通过同源重组的方法成功地敲除了两个基因的ORF,获得了突变体△pngl和△png2。功能分析表明PNG1和PNG2在细胞生长和DNA损伤应答过程中执行了不同功能。  细胞生长和流式细胞术分析表明PNG1基因不仅是细胞正常生长所必需的,同时也是DNA损伤修复所必需的,PNG1的缺失使细胞阻滞在了S期。酵母双杂交,Pull-down实验,Co-IP实验,荧光共定位实验表明Pnglp与组蛋白乙酰转移酶Mstlp密切相关,但两者可能没有直接的相互作用。TSA拯救实验和western blot检测表明Pnglp参与了组蛋白H4的乙酰化修饰。PNG1基因的缺失使DNA损伤条件下裂殖酵母H4K5、K8、K12位的乙酰化水平下降,并且这种乙酰化程度的下调直接抑制了DNA损伤修复相关基因(如RAD22,ASFl,SPT3).染色质重构相关基因(如SNF5),细胞周期相关基因(如CDC20,CDC22,ENGl,AGN1)的表达。更进一步的研究发现,在PNG1缺失突变体中分别过量表达DNA损伤修复核心基因RAD22可以拯救PNG1缺失带来的DNA损伤敏感的表型。因此,PNG1很可能通过RAD22途径参与了DNA损伤应答过程。  第二部分、水稻中DREB基因抗旱功能的初步研究  DREB家族转录因子是一类参与调控植物体对干旱应答的重要的调节因子。这类转录因子可以特异性地结合到C-repeat/DREIi~式元件上(核心序列为A/GCCGAC),并以一种不依赖于ABA的方式,调控下游许多低温或干旱诱导基因的表达。在我们的研究中,我们在水稻中分离了3个新的水稻中的DREB家族转录因子:OsDREBIE、OsDREBIG和OsDREB2B。这三者与拟南芥中的DREB家族转录因子具有序列和结构上的高度同源性。酵母单杂交试验表明这三者可以特异性地结合到C-repeat/DRE顺式元件上。为了研究这三个基因在水稻中的功能,我们通过农杆菌介导的转基因方法将这三个基因在水稻中过量表达。对转基因水稻植株的分析表明,过表达OsDREBIG和OsDREB2B可以显著提高水稻对于干旱的耐受能力,但是过表达OsDREBIE只能稍微提高水稻对于干旱的耐受能力。这一实验结果表明,水稻中不同的DREB基因可能通过不同的方式参与干旱等压力应答的途径。
其他文献
会议
会议
为了探索高浓度CO2(0.5%)胁迫条件对植物叶片两种重要的半自主细胞器即叶绿体和线粒体的影响,本文以四倍体刺槐(Tetraploid Robinia Pseudoscacia L.)和二倍体刺槐(Diploid Robini
随着GIS行业的飞速发展,目前在面向大众化的GIS服务中多采用海量栅格数据作为地理信息的表现方式。栅格数据以其获取快速、信息丰富、地域广泛、美观实用等优点,被广泛应用于交
会议
会议
会议
根据2013年度世界卫生组织道路安全现状报告显示,每年,全世界约有124万人死于道路交通事故,其中约44%的车祸发生原因是是由于车辆偏离正常车道。车道偏离预警系统(LDWS)是根据行
会议
会议