论文部分内容阅读
目的:通过RNA干扰技术沉默人宫颈癌HeLa细胞乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,在细胞水平研究HIF-1α对宫颈癌HeLa细胞上皮细胞-间质变标记蛋白(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)表达的影响。
方法:将人宫颈癌HeLa细胞株(记为H0细胞)、转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株(记为H1细胞)及转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞株(记为H2细胞)分别行常氧及乏氧(150μmol/LCoCl2培养12小时)培养,应用Western blotting、免疫组织化学法检测每组HeLa细胞中HIF-1α、上皮标记蛋白E-cadherin、间质标记蛋白vimentin、N-cadherin的表达情况。组间比较采用方差齐性分析及t检验,以P<0.05为有统计学差异。
结果:1、Western blotting分析显示,H0细胞乏氧组HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度分别为1.182±0.251、0.409±0.112、3.187±0.523、1.638±0.417;H1细胞乏氧组HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度分别为1.364±0.279、0.441±0.126、3.276.±0.601、1.437±0.279;H2细胞乏氧组HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度分别为0.248±0.053、0.833±0.257、0.992±0.270、1.004±0.236。2、免疫组织化学显示H0细胞、H1细胞在乏氧时HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白高表达,而E-cadherin低表达,H2细胞在乏氧时HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白表达显著减弱,而E-cadherin高表达。3、H2细胞乏氧组与H0细胞乏氧组间差异有统计学意义(P<0.05),H1细胞乏氧组与H0细胞乏氧组间差异无统计学意义。
结论:通过shRNA干扰抑制人宫颈癌HeLa细胞乏氧诱导因子-1α,可一定程度上抑制乏氧环境中宫颈癌HeLa细胞上皮细胞-间质变。