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该课题主要应用抑制性消减杂交技术构建培养后MEF细胞相对于原代MEF细胞筹异表达基因的cDNA消减文库,并运用生物信息学方法分析所获得的实验结果,以期查找出其中对ES细胞增殖分化有重要调控作用的基囚群.首先提取对培养前（driver）、后（t est er）的MEF mRNA,与商售的cDNA ExpressionArray尼龙杂交膜进行微阵列法杂交检测,在已知基因范围内进行初步分析.对培养前、后的MEFmRNA进行抑制性消减杂交分析.将mRNA逆转录为cDNA,经Rsal酶切后将实验组（tester）分为两组,分别与2种不同的接头连接,再与对照组（driver） cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR.将产物与pGEM-T载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取阳性克隆PCR扩增后进行测序与同源性分析.结果显示,培养后MEF相对于胚胎成纤维细胞确实存在差异表达基因群,在微阵列法中检测到24类差异表达的基因.抑制性差减杂交分析,成功构建了MEF差异表达基因的cDNA消减文库.在随机挑取的145个克隆中,测得了128条EST序列,经生物信息学分析,它们代表了42类不同基因和3条新基因序列.（这些差异表达基因及其可能的功能见附表2、3）,3条新基因序列已被GenBank收录,提示这些EST序列所代表的基因可能与ES细胞增殖分化调控相关.