内生固氮菌对环境因子的适应性及其对多枝柽柳的抗旱效应研究

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内生固氮菌在提高宿主的营养及竞争力,增强宿主植物的抗逆性方面有巨大的潜力,在生态恢复中显示出了良好的应用前景。本文以从荒漠灌木多枝柽柳(Tamarix ramosissima Ledeb.)、黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)中分离获得的内生固氮菌株为材料,分析其对环境因子的适应性,并试验确定其定殖传导特性和扩繁参数。在此基础上,研究利用其接种对荒漠灌木的抗旱性能及生长效应,为探讨构建、创制和应用灌木固氮、促生、抗逆多功能接种剂提供科学依据和技术支持。主要研究结果如下:从多枝柽柳、黑果枸杞组织中分离获得的5个内生固氮菌株在pH值5.0-10.0和15-40℃温度范围内均能生长并表达固氮酶活性。菌株能耐受0.1%~5.0%NaCl、0.5~4mmol·L-1NH4+、-0.3~-0.15mPa渗透势,表现出较强的抗逆性能,但各菌株之间存在一定差异,其中DENB20菌株综合抗性较强。DENB20菌株浸种回接多枝柽柳,菌体能侵入根部并传导至枝叶组织中,但根部组织更适合其定殖。正常供水条件下根组织中菌体增殖迅速,载菌量始终显著高于干旱胁迫处理。干旱胁迫会减低增殖速度、载菌量及菌群稳定性,影响幅度随胁迫强度的增加而增强。在干旱胁迫下DENB20菌株接种具有一定的固氮效能,能提高多枝柽柳种子发芽率,促进植株对钾元素的吸收,提高根际土壤有机质和速效氮含量。在正常供水及轻度、中度、重度干旱胁迫下接种植株生物量鲜重分别较未接种植株增加19.6%、13.3%、3%、6.1%;生物量干重较对照分别增加了32%、27%、5.9%、60%,在一定程度上减轻干旱胁迫造成的生长损失。接种植株SOD、CAT酶活明显高于未接种植物,在干旱胁迫下这种优势效应愈加突出。同时,还可降低植株丙二醛(MDA)、脯氨酸含量,细胞质膜相对透性降低,减轻膜脂过氧化造成的伤害程度,增强根系活力,减少植物受水分胁迫的影响,提高植株抗旱性。经过单因子和多因子正交试验优化,确定DENB20菌株摇瓶发酵最佳条件为:苹果酸10g/L、硝酸钠0.05g/L、KH2PO4 0.2g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、NaCl 0.2g/L、CaSO4·2H2O 0.1 g/L、CaCO35.0g/L,初始pH=5,培养温度35℃,培养时间24h。
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