随着人们工作以及生活模式的转变,宠物已经成为广大家庭的组成成员。目前,犬的乳腺肿瘤发病率越来越高,但尚未发现有效、无副作用的针对犬乳腺肿瘤治疗的药物。因此,细胞治疗以及细胞与药物配合治疗的研究显得十分必要。羊水间充质干细胞(Amniotic Fluid Mesenchymal Stem Cells,AF-MSCs)是从围产期羊水组织中分离的多能基质细胞,具有免疫抑制功能和组织修复能力,可在临床广泛使用。并且,羊水间充质干细胞在异体移植中不会形成畸胎瘤。犬羊水来源间充质干细胞(canine Amniotic Fluid Mesenchymal Stem Cells,c AF-MSCs)的生物学特征、体外培养特性及其在癌症治疗中的作用至今仍没有系统研究。因此,我们选取c AF-MSCs进行体外增殖、多向分化、以及抗癌能力的研究,为犬乳腺肿瘤治疗提供前期研究基础。1.从犬羊水中获得的细胞符合间充质干细胞的体外培养特性。试验在犬剖腹产时,收集羊水,通过离心法获取细胞,对分离的细胞进行离体培养与鉴定。结果发现:从犬羊水中获得的细胞为纺锤形贴壁生长,呈旋涡或网状有序排列,生长曲线呈“S”型;经成脂、成骨、成软骨分化液诱导后细胞能被油红O、茜素红、阿利新蓝染色,提示分离的细胞能定向分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞;经成神经分化液诱导后的细胞能表达NESTIN以及GFAP,提示分离的细胞能定向分化为神经细胞。流式结果显示这种细胞表达CD44、CD73、CD90、CD105、HLA-ABC,不表达CD45、HLA-DR。以上结果提示,本试验分离培养的c AF-MSCs符合间充质干细胞基本特征,具有多向分化能力和低免疫原性。2.c AF-MSCs体内外对犬乳腺肿瘤(CTM1211)的抑制作用。将c AF-MSCs与CTM1211共培养24 h、48 h、72 h、96 h,然后检测不同时间的CTM1211细胞活性。结果发现,c AF-MSCs与CTM1211共培养72 h,c AF-MSCs对CTM1211增殖的抑制效果最好。计算共培养0 h、12 h、24 h、36 h后的细胞迁移,结果发现:c AF-MSCs能抑制CTM1211的迁移,且差异显著。Annexin V-FITC/PI双染检测共培养72 h之后的细胞凋亡率,发现c AF-MSCs能显著促进CTM1211的早期凋亡。q PCR检测凋亡相关因子发现,p53、Bax的表达增加,survivin和Bcl-2的表达降低,提示c AF-MSCs可提高CTM1211的凋亡基因的表达。在裸鼠(BALB/c)皮下注射CTM1211细胞造模成功后,对模型小鼠尾静脉注射c AF-MSCs进行治疗,治疗三次后解剖小鼠,将肿瘤取出进行组织学分析,计算肿瘤组织凋亡细胞比例。组织学检测心、肝、脾、肺、肾,发现肿瘤细胞无转移,治疗组凋亡细胞占7.43%显著高于对照组;检测肿瘤组织基因和蛋白的表达,发现治疗组凋亡相关基因p53、Bcl-2、Bax的表达和蛋白Bax含量显著高于对照组,survivin的表达显著低于对照组。结果提示,c AF-MSCs可以促进犬乳腺肿瘤的凋亡、抑制其迁移。