辅酶Q生物合成关键酶基因DDSA的克隆及转化水稻研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:delphi_quaker
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辅酶Q10具有抗氧化,治疗心血管疾病,抗肿瘤,延缓衰老和抗疲劳等诸多作用。随着年龄的增长,人体内辅酶Q10的含量在20岁后就日趋减少,导致各种疾病的产生。水稻作为人类的主食,由于缺乏十聚异戊二烯焦磷酸合成酶(DDSA),主要是合成辅酶Q9,而无法最终合成辅酶Q10。本研究利用基因工程手段将编码辅酶Q10生物合成的关键基因。DDSA导入水稻中,使其在水稻胚乳中特异性高效表达,以培育出稻米含有辅酶Q10的水稻优异新种质。主要研究结果如下: 1、采用PCR方法,从弱氧化葡糖杆菌(Goxydans ATCC621)中分离克隆了辅酶Q10生物合成关键酶基因DDSA,该基因长度为948 bp,编码315个氨基酸,蛋白质分子量约为33.9 KDa,在Genebank进行同源性比较,结果表明,克隆的基因与已报道的G.oxydans621的DDSA基因具有很高的相似性达99%,推导的氨基酸序列中具有聚异戊二烯焦磷酸合成酶典型的7个保守区域,表明克隆得到的DDSA基因可能具有编码十聚异戊二烯焦磷酸合成酶的能力。 2、以质粒载体pCAMBIA1301为基础,分别将水稻谷蛋白基因启动子Gt1、DDSA基因、NOS终止子依次插入到载体pCAMBIA1301的多克隆位点,从而构建得到能在水稻胚乳中特异性表达DDSA基因的植物表达载体pCAMBIA1301-Gt1-DDSA-NOS。 3、在上述基础上,利用根癌农杆菌介导法,将含有DDSA基因的植物表达载体pCAMBIA1301-Gt1-DDSA-NOS导入优质水稻品种“台粳九号”幼胚诱导形成的愈伤组织中,经潮霉素抗性筛选,抗性愈伤分化成苗,共获得6株抗性植株。然后对这些抗性植株进行PCR检测,结果显示其中4株呈阳性。
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