论文部分内容阅读
目的 观察健脾化湿颗粒(JPG)对D-IBS模型大鼠结肠Na+-K+-ATP酶活性以及结肠紧密蛋白(Occludin,Occ)、水通道蛋白3、4(AQP3、AQP4)含量和表达水平的影响,以期揭示JPG改善D-IBS腹泻症状的可能作用机制,丰富中医药理论。方法 1随机将SD大鼠分成正常组(N)、模型组(M)、匹维溴铵组(PC)及JPG低(LD)、中(MD)、高剂量组(HD),分为6组,每组10只,除N外,其余各组大鼠都采取番泻叶灌胃加束缚应激的方法,复制D-IBS大鼠模型。造模成功后施加药物干预,正常组:全程给予生理盐水灌胃;模型组:番泻叶灌胃加束缚操作后60min给予生理盐水灌胃;匹维溴铵组:番泻叶灌胃加束缚操作后60min给予匹维溴铵(1.5mg/mL)灌胃;JPG(低、中、高)剂量组:番泻叶灌胃加束缚操作后60min分别给予JPG低中高剂量(6.25g/kg、12.5g/kg、25g/kg)灌胃,各组均持续给药2周。灌胃剂量均为1 0ml/kg。2指标检测 1)采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测结肠Na+-K+-ATP酶活性。2)采用免疫组织化学方法(Immunohistochemistry,IHC)检测结肠 Occludin、AQP3 和 AQP4 蛋白的表达量。3)采用免疫印迹法(Western B1ot,WB)测结肠Occludin、AQP3和AQP4蛋白表达量。4)采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法检测结肠Occludin、AQP3 和 AQP4 蛋白的 mRNA 表达量。结果 1大鼠重量变化:建模前各组大鼠体重无差异(P＞0.05)。建模后,与N组比较,M、LD、MD、HD 及 PC 大鼠重量(250.50±8.67,256.50±14.4,257.10±14.48,252.50±17.16,257.30±13.55vs294.30±21.50)显著下降(P＜0.05)。2稀便级变化:建模前各组大鼠稀便级无差异(P>0.05)。与N组相比,造模第 14 天 M、LD、MD、HD 及 PC 组大鼠稀便级(3.36±0.72,3.36±0.68,3.38±0.68,3.36±0.34,3.40±0.68vs0.10±0.22)显著升高(P＜0.05)。3结肠组织病理学变化:病理检查各组模型大鼠均无水肿、溃疡、充血、炎症细胞浸润等病理改变,与正常组大鼠相比较,其余组未见明显差异。4 ELISA方法检测结肠Na+-K+-ATP酶活性:与M组相比,LD、MD、HD及 PC 组大鼠结肠 Na+-K+-ATP 酶活性(4.47±0.69,6.15±0.15,7.03±0.70,4.67±0.66vs1.66±0.20)显著升高(P＜0.05)。5 IHC检测结肠紧密连接蛋白、水通道蛋白3和4的表达量变化:与M组相比,LD、MD、HD 及 PC 组大鼠结肠 Occludin(0.33±0.02,0.43±0.01,0.46±0.01,0.23±0.01vs0.16±0.01)、AQP3(0.35±0.01,0.41±0.01,0.44±0.01,0.30±0.01vs0.18±0.01)和AQP4 表达(0.27±0.01,0.32±0.02,0.39±0.01,0.28±0.02vs0.17±0.01)显著升高(P＜0.05)。6 WB方法检测结肠Occludin、AQP3和AQP4表达量:与M对照组相比较,LD、MD、HD 及 PC 大鼠结肠 Occludin(0.99±0.01,1.08±0.02,1.16±0.03,0.70±0.02vs0.47±0.03)、AQP3(0.84±0.05,0.94±0.02,1.12±0.04,0.77±0.02vs0.59±0.04)和 AQP 4(1.12±0.02,1.24±0.03,1.37±0.02,0.42±0.01vs0.10±0.01)表达显著升高(P＜0.05)。7 RT-PCR法检测结肠Occludin、AQP3和AQP4的mRNA表达量:与M组相比,LD、MD、HD 及 PC 组大鼠结肠 Occludin(0.99±0.01,1.09±0.01,1.19±0.03,0.61±0.01vs0.53±0.01)、AQP3(0.95±0.01,1.01±0.02,1.10±0.03,0.82±0.01vs0.74±0.02)和 AQP4(0.95±0.02,1.07±0.02,1.18±0.01,0.82±0.01vs0.66±0.01)mRNA 表达显著升高(P＜0.05)。结论 1健脾化湿颗粒可有效改善D-IBS模型大鼠腹泻症状。2健脾化湿颗粒可以提高D-IBS模型大鼠结肠Na+-K+-ATP酶活性,增加Occludin、AQP3、AQP4及其mRNA蛋白表达,正向调节结肠对水液的摄取能力,这可能是健脾化湿颗粒治疗D-IBS腹泻症状的作用机制之一。图4幅;表12个;参55篇。