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【目的】
1.检测PCDH9在恶性黑素瘤组织中的表达。
2.探讨过表达PCDH9对恶性黑素瘤细胞增殖、侵袭的作用及对细胞凋亡、周期的影响。
3.探讨过表达PCDH9对恶性黑素瘤肿瘤相关因子（Rac1、Pyk2、CyclinD1、FAK、MMP2、MMP9）表达的影响。
【方法】
1.收集广东医科大学附属医院门诊保存的45例人正常皮肤组织、30例人色素痣组织、30例人恶性黑素瘤（MM）组织石蜡标本。采用免疫组化方法，检测PCDH9蛋白在正常皮肤、色素痣及MM组织中的表达并比较各组间的差异。
2.培养人A375、G361黑素瘤细胞；本实验分为3组，分别为空白组（未转染质粒）、空载体病毒组（转染空质粒）、慢病毒组（转染PCDH9过表达载体质粒），用嘌呤霉素进行筛选，获取稳定转染的细胞株进行后续实验。
3.CCK8检测各组细胞的增殖抑制率；qRT-PCR、Westernblot分别检测Rac1、pyk2、CyclinD1、FAK、MMP2、MMP9mRNA及蛋白表达水平；细胞划痕实验检测各组细胞的生长迁移能力；流式细胞术测各组细胞凋亡、周期的变化。
【结果】
1.免疫组化结果：PCDH9在人MM组织中表达较低；所有正常皮肤和色素痣组织标本中PCDH9呈强染色，而MM中仅23.3%（7/30）有PCDH9染色，明显低于非肿瘤组织。
2.CCK-8检测结果：培养24h后，慢病毒组细胞的抑制率明显高于空白组和空载体病毒组，且随着培养时间的延长，差异更显著，72h达到高峰（P＜0.01），96h后开始下降，空白组和空载体病毒组的差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.qRT-PCR检测Rac1、Pyk2、CyclinD1、FAK、MMP2、MMP9mRNA表达结果：与空白组和空载体病毒组相比，慢病毒组过表达PCDH9能上调CyclinD1、Pyk2mRNA表达（P＜0.05），下调Rac1、MMP2、MMP9mRNA表达水平（P＜0.05）。3组FAKmRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05）。
4.Westernblot检测CyclinD1、Pyk2、FAK、MMP2、MMP9、Rac1蛋白表达结果：在A375、G361两种MM细胞系中，慢病毒组CyclinD1、Pyk2蛋白表达高于空白组和空载体病毒组，差异有统计学意义（P＜0.05）；MMP2、MMP9、Rac1蛋白表达低于空白组和空载体病毒组（P＜0.05）；3组FAK蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。
5.细胞划痕实验结果显示：在A375、G361两种MM细胞系中，慢病毒组48h细胞划痕愈合速度较空白组和空载体病毒组慢，差异有统计学意义（P＜0.05）；而3组24h细胞划痕愈合速度差异无统计学意义（P＞0.05）。
6.流式细胞术检测细胞凋亡：在A375、G361两种细胞系中，慢病毒组细胞凋亡率最高（P＜0.05），而空白组与空载体病毒组细胞凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）。
7.流式细胞术检测细胞周期：在三个时期中，与空白组或者空载体病毒组相比，慢病毒组细胞百分率变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05），两种细胞系结果一致。
【结论】
1.PCDH9在人MM组织中呈低表达。
2.过表达PCDH9可抑制人MM细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡。
3.过表达PCDH9基因转染人MM细胞后，可上调Pyk2、CyclinD1；下调Rac1、MMP2、MMP9的表达。
1.检测PCDH9在恶性黑素瘤组织中的表达。
2.探讨过表达PCDH9对恶性黑素瘤细胞增殖、侵袭的作用及对细胞凋亡、周期的影响。
3.探讨过表达PCDH9对恶性黑素瘤肿瘤相关因子（Rac1、Pyk2、CyclinD1、FAK、MMP2、MMP9）表达的影响。
【方法】
1.收集广东医科大学附属医院门诊保存的45例人正常皮肤组织、30例人色素痣组织、30例人恶性黑素瘤（MM）组织石蜡标本。采用免疫组化方法，检测PCDH9蛋白在正常皮肤、色素痣及MM组织中的表达并比较各组间的差异。
2.培养人A375、G361黑素瘤细胞；本实验分为3组，分别为空白组（未转染质粒）、空载体病毒组（转染空质粒）、慢病毒组（转染PCDH9过表达载体质粒），用嘌呤霉素进行筛选，获取稳定转染的细胞株进行后续实验。
3.CCK8检测各组细胞的增殖抑制率；qRT-PCR、Westernblot分别检测Rac1、pyk2、CyclinD1、FAK、MMP2、MMP9mRNA及蛋白表达水平；细胞划痕实验检测各组细胞的生长迁移能力；流式细胞术测各组细胞凋亡、周期的变化。
【结果】
1.免疫组化结果：PCDH9在人MM组织中表达较低；所有正常皮肤和色素痣组织标本中PCDH9呈强染色，而MM中仅23.3%（7/30）有PCDH9染色，明显低于非肿瘤组织。
2.CCK-8检测结果：培养24h后，慢病毒组细胞的抑制率明显高于空白组和空载体病毒组，且随着培养时间的延长，差异更显著，72h达到高峰（P＜0.01），96h后开始下降，空白组和空载体病毒组的差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.qRT-PCR检测Rac1、Pyk2、CyclinD1、FAK、MMP2、MMP9mRNA表达结果：与空白组和空载体病毒组相比，慢病毒组过表达PCDH9能上调CyclinD1、Pyk2mRNA表达（P＜0.05），下调Rac1、MMP2、MMP9mRNA表达水平（P＜0.05）。3组FAKmRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05）。
4.Westernblot检测CyclinD1、Pyk2、FAK、MMP2、MMP9、Rac1蛋白表达结果：在A375、G361两种MM细胞系中，慢病毒组CyclinD1、Pyk2蛋白表达高于空白组和空载体病毒组，差异有统计学意义（P＜0.05）；MMP2、MMP9、Rac1蛋白表达低于空白组和空载体病毒组（P＜0.05）；3组FAK蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。
5.细胞划痕实验结果显示：在A375、G361两种MM细胞系中，慢病毒组48h细胞划痕愈合速度较空白组和空载体病毒组慢，差异有统计学意义（P＜0.05）；而3组24h细胞划痕愈合速度差异无统计学意义（P＞0.05）。
6.流式细胞术检测细胞凋亡：在A375、G361两种细胞系中，慢病毒组细胞凋亡率最高（P＜0.05），而空白组与空载体病毒组细胞凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）。
7.流式细胞术检测细胞周期：在三个时期中，与空白组或者空载体病毒组相比，慢病毒组细胞百分率变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05），两种细胞系结果一致。
【结论】
1.PCDH9在人MM组织中呈低表达。
2.过表达PCDH9可抑制人MM细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡。
3.过表达PCDH9基因转染人MM细胞后，可上调Pyk2、CyclinD1；下调Rac1、MMP2、MMP9的表达。