【摘 要】
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目的:本课题通过16S rRNA基因测序比较强直性脊柱炎患者和健康人群以及强直性脊柱炎肾虚督寒证和肾虚湿热证之间的舌苔菌群差异,初步探究AS患者与健康人之间、不同AS中医证型与舌苔菌群的相关性,以期望为AS的中医辨证分型提供客观的生物学依据。方法:纳入强直性脊柱炎患者共50名,其中肾虚督寒证及肾虚湿热证各25名,同时纳入43例健康志愿者作为对照组。收集AS患者及对照组的舌苔,提取DNA,通过PCR
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目的:本课题通过16S rRNA基因测序比较强直性脊柱炎患者和健康人群以及强直性脊柱炎肾虚督寒证和肾虚湿热证之间的舌苔菌群差异,初步探究AS患者与健康人之间、不同AS中医证型与舌苔菌群的相关性,以期望为AS的中医辨证分型提供客观的生物学依据。方法:纳入强直性脊柱炎患者共50名,其中肾虚督寒证及肾虚湿热证各25名,同时纳入43例健康志愿者作为对照组。收集AS患者及对照组的舌苔,提取DNA,通过PCR扩增,使用Illumina Miseq平台进行16SrRNA基因测序,对测序结果进行生物信息学分析,比较AS组患者与健康对照组以及两种中医证型之间的菌群差异。结果:1.本次研究初步纳入符合纳入标准的AS组患者63例和健康对照组43例,其中AS组中有肾虚督寒患者38例、肾虚湿热患者25例。经过筛选,最后实际送检测序样本为肾虚督寒及肾虚湿热证患者各25例,健康对照组43例。测序的AS组患者与对照组在性别、年龄、BMI上无统计学差异(P>0.05)。中医证型方面,肾虚督寒组和肾虚湿热组患者在性别、年龄、BMI、ESR、CRP、ASDAS-CRP、BASDAI五项指标上无统计学差异(P>0.05)。2.本次测序样本共93例,所有样本质控后共获得有效序列8,823,205条,其中AS组患者和对照组平均有效序列分别为62599条(97.2%)和62633条(96.5%)。93个样本共产生17133个OTU,共测出了 16个门,24个纲,41个目,63个科,96个属。3.Alpha多样性分析显示AS组的shannon、simpson、ace、chao1多样性指数均低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);而肾虚督寒组和肾虚湿热组两组样本在shannon、simpson、ace、chao1多样性指数比较上均无统计学差异(P>0.05)。Beta多样性方面,PCoA分析显示AS组患者舌苔菌群的组成和健康志愿者之间存在一定差异,AS组患者个体间的离散程度较对照组明显(R2=0.032,P=0.019);而肾虚督寒组和肾虚湿热组两组舌苔菌群在组成与分布上无统计学差异(R2=0.023,P=0.212)。4.AS组患者与对照组舌苔菌群在门、科、属三个水平的差异性分析显示:在门水平,AS患者舌苔菌群中拟杆菌门的丰度低于健康组(P<0.01);在科水平上,AS组舌苔菌群中的普雷沃氏菌科、消化链球菌科、FamilyⅩⅢ、Peptococcaceae、心杆菌科的丰度低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而微球菌科、Burkholderiaceae、Lactobacillaceae、肠球菌科、Erysipelotrichaceae、肠杆菌科的丰度均高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);在属水平上,AS组舌苔菌群中的普雷沃氏菌属、普雷沃氏菌7属、消化链球菌属、Eubacteriumnodatumgroup、消化球菌属、普雷沃氏菌1属、FamilyⅩⅢUCG-001、心杆菌属、巨单胞菌属、Faecalibacterium的丰度低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而罗氏菌属、Delftia、ErysipelotrichaceaeUCG-007、乳杆菌属、Lautropia、肠球菌属、克雷伯菌属的丰度均高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.肾虚督寒组和肾虚湿热组舌苔菌群在门、科、属水平的差异性分析显示:在门水平未找到有统计学差异的菌门;在科水平上,肾虚督寒组舌苔菌群中棒状杆菌科、心杆菌科的丰度低于肾虚湿热组,差异具有统计学意义(P<0.05);属水平上,肾虚督寒组舌苔菌群中棒状杆菌属、心杆菌属的丰度低于肾虚湿热组,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.舌苔菌群与疾病活动指标的相关性分析发现罗氏菌属、Gemella与CRP成正相关,BASDAI与放线菌属成正相关,纤毛菌属(Leptotrichia)与ESR、CRP、ASDAS-CRP均呈负相关,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.AS组舌苔菌群多样性低于正常对照组,物种丰度差异性分析显示,两组在属水平有17个菌属存在统计学差异,其中差异最显著的是拟杆菌门的普雷沃氏菌7属(Prevotella7)。2.肾虚督寒组和肾虚湿热组AS患者在舌苔菌群多样性上无明显差异,物种丰度差异性分析显示肾虚督寒组舌苔菌群中棒状杆菌属(Corynebacterium)、心杆菌属(Cardiobacterium)的丰度低于肾虚湿热组,其中差异最显著的是隶属于放线菌门的棒状杆菌属,棒状杆菌属或可能成为区分两组中医证型的舌苔标志菌群。
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