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脊髓损伤对病人常造成永久性灾难性的后果,损伤修复的研究对患者重获行为能力、造福社会具有重要医疗应用价值和社会影响。近年来将神经干细胞移植用于神经系统损伤的修复进行了极有价值的探索,移植细胞的存活、增殖是患者恢复功能的前提,也是科学家们关注的问题。为促进神经干细胞移植,我们克隆到小鼠神经生长因子(NT-3)基因,并构建成表达载体,转化神经干细胞株,通过建立脊髓损伤模型,研究了增强表达NT-3基因的神经干细胞对细胞存活、增殖、损伤恢复的影响。
本论文主要研究结果如下:
1克隆了小鼠源神经生长因子NT-3基因并进行了序列测定,构建了NT-3基因表达载体并在神经干细胞株C17.2实施了表达。结果表明:小鼠NT-3基因全长777bp;NT-3基因转染神经干细胞形态观察显示,NT-3基因的表达对神经干细胞生长、分化有显著促进作用(p<0.01)。
2基于运动评分(BBB locomotor rating scale)规则,探索、建立了小鼠脊髓损伤模型平台技术;成功构建了30只小鼠脊髓损伤模型用于NT-3基因神经干细胞表达对损伤移植研究,该技术已申请发明专利(专利号:200610026209.0)。
3损伤修复的移植细胞检测及行为学分析。以神经干细胞为载体,研究了携带NT-3神经干细胞对损伤的修复作用。结果表明:转染的NT-3基因的神经干细胞已由损伤部位向组织四周迁移,且移动范围较大,细胞活存率高。BBB运动评分测试也显示细胞移植对损伤有明显的促进作用(p<0.01)。