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胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎疾病的病原菌,该病是世界范围内流行、严重危害现代化养猪业的重要传染病。APP具有众多血清型,其致病力和免疫原性各不相同,主要血清型间无免疫交叉保护,是制约APP致病机理和疫苗研究的瓶颈,严重影响了APP的诊断、检疫和预防。本研究选择毒力存在差异、而无免疫交叉保护的APP血清1型和3型菌株为对象,采用代表性差异分析法(RDA),分别构建了基因组DNA差减基因文库和cDNA差异表达基因文库,系统筛选1型和3型基因组差异基因和差异表达基因,经生物信息学分析后,从中选取自转运黏附素基因(差异基因)的功能区adh和蛋白酶clpP基因(差异表达基因)进行克隆与序列分析,并采用实时定量PCR分析clpP基因的相对表达,分别对adh和clpP基因进行原核表达,得到GST-Adh和GST-ClpP重组蛋白,测定其对昆明小鼠抗APP感染的免疫保护性,并利用凝血酶切除GST,纯化Adh蛋白,检测Adh对猪肺上皮细胞的黏附活性。结果表明,获得APP 1型8条差异基因片段,APP3型11条差异基因片段,经PCR鉴定发现这19条差异基因在15个血清型中分布不同;获得APP 1型22条上调表达基因,APP 3型20条上调表达基因,clpP基因在APP 1型的相对表达量为3型的3.22倍;成功获得融合蛋白GST-Adh和GST-ClpP,大小分别约为81kDa和48kDa,并以可溶性的形式获得表达;GST-Adh蛋白对APP血清5b型的保护率为7/10,对血清1型、3型和5a型无明显保护作用;Adh蛋白对猪肺上皮细胞具有黏附活性,该蛋白及其抗体能抑制APP对猪肺上皮细胞的黏附作用;GST-ClpP蛋白对APP血清1型的保护率为6/10,对血清3型无明显保护作用。本研究为今后APP不同血清型致病机理研究、新型多价疫苗研究以及特异性分子诊断技术的建立提供必要的基础。