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目的:构建hMAM启动子/增强子调控报告基因表达载体,探讨hMAM启动子及增强子序列在乳腺癌细胞中的特异性调控作用和hMAM对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响。方法:(1)采用半定量RT-PCR检测不同组织癌细胞株,胃癌细胞(7901)、肝癌细胞(7721)、子宫内膜癌细胞(HEC)及乳腺癌细胞株(MCF-7、ZR-75-30、MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-415)hMAM mRNA的表达情况;(2)应用PCR技术,从基因组DNA中扩增出385bp启动子DNA序列,1225bp增强子DNA序列,构建于PGL3报告基因上游,获含hMAM启动子的PGL3载体(PGL3-P),含hMAM启动子与增强子的PGL3载体(PGL3-EP);(3)将PGL3-P及PGL3-EP载体分别转染体外培养的乳腺癌细胞MDA-MB-415、T47D及胃癌细胞7901,应用微孔板式化学发光检测仪检测报告基因荧光素酶的活性,分析启动子和增强子序列对乳腺癌细胞的基因表达调控作用。(4)分别构建含hMAM基因及LipophilinB基因的PcDNA3.1(+)真核表达载体,转染乳腺癌细胞。(5)应用transwell及MTT方法分析hMAM对肿瘤细胞侵袭及细胞增殖方面的作用。结果:(1)半定量RT-PCR检测结果显示非乳腺癌细胞7901、7721、HEC不表达hMAM,乳腺癌细胞MCF-7、ZR-75-30、MDA-MB-231不表达hMAM,乳腺癌细胞T47D、MDA-MB-415表达hMAM,MDA-MB-415细胞较T47D细胞表达更强;(2)酶切图谱分析、DNA序列测定表明成功构建PGL3-P、PGL3-EP荧光素酶报道基因表达载体(3)荧光素酶报告基因检测结果分析表明,hMAM开放阅读框上游+59～-320bp启动子序列,-4.4～-5.6 kb之间的增强子序列,能够调控报告基因的表达,在MDA-MB-415乳腺癌细胞具有基因表达调控的作用。(4)MTT法结果表明:转染PcDNA3.1(+)-hMAM及PcDNA3.1(+)-lipophilinB真核表达载体的T47D细胞增殖无明显改变。(6)体外侵袭实验方法结果显示:共转染PcDNA3.1(+)-hMAM及PcDNA3.1(+)-lipophilinB真核表达载体的T47D细胞侵袭能力减弱。结论:hMAM基因开放阅读框上游+59～-320bp之间启动子序列、-4.4～-5.6 kb之间DNA序列,在MDA-MB-415乳腺癌细胞具有调控基因表达的作用;hMAM与lipophilinB共同作用对乳腺癌细胞侵袭能力可能有抑制作用。