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目的:探究酪氨酸蛋白激酶6下游(Downstream Of Tyrosine Kinase 6,DOK6)和基因间长链非编码RNA 324(Long Intergenic Non-Protein Coding RNA 00324,LINC00324)两者在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达及甲基化水平,并分析两者的临床意义及对白血病细胞株的生物学表型的影响。方法:本研究收集32名正常人、108名初诊成人AML患者的骨髓样本及相应临床数据作为研究对象。利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术检测正常人和A ML患者骨髓样本中DOK6和LINC00324的相对表达水平。利用实时定量甲基化特异性P CR(real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)和非甲基化特异性PCR(u nmethylation-specific PCR,USP)技术检测正常人和AML患者骨髓样本中DOK6和LINC00324的启动子区甲基化水平。利用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BS P)技术验证MSP检测结果的准确性。利用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deo xycytidine,5-aza-dC)降低白血病细胞株(HL-60/THP-1)基因组DNA甲基化水平,通过观察不同浓度处理组间DOK6和LINC00324表达和启动子区甲基化水平的变化及相关关系分析可能的表观遗传调控机制。利用细胞计数法检测过表达LINC00324后白血病细胞株(H L-60/THP-1)的增殖能力的变化。利用流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)检测过表达LINC00324后白血病细胞株的凋亡情况的变化。结果:1.DOK6在AML中低表达、高甲基化并与AML患者预后显著相关。初诊AML患者骨髓样本中DOK6的mRNA表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。根据受试者工作特征曲线(receiver operating characteristiccurve,R OC)曲线所确定的cutoff值,将AML总体分为高低表达两组后发现:DOK6低表达组较高表达组有更小的发病年龄(中位数:54岁vs 59岁,P=0.031)、更少的血小板(plate let,PLT)计数(中位数:29.5*10^9/L vs 48.0*10^9/L,P=0.046)以及更高的完全缓解率(55.8%vs.25.0%,P=0.014)。Kaplan-Meier分析显示:DOK6低表达组在总体AML和非急性早幼粒细胞白血病(non-acute promyelocytic leukemia,non-APL)中均比高表达组有更长的总体生存(Overall Survival,OS)时间(P=0.010和P=0.045)。Cox单因素及多因素分析也发现:DOK6低表达是AML患者总体生存时间的独立影响因素(P=0.016)。DOK6启动子区甲基化水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.037)。DOK6启动子区高甲基化AML患者和低甲基化AML患者之间的FAB分布存在统计学差异(P=0.037)。在总体AML病例中,DOK6启动子区高甲基化患者的总体生存时间(OS)明显比DOK6启动子区低甲基化的患者更长(P=0.042)。此外,在非APL患者和年龄小于等于60岁的AML患者中,DOK6启动子区高甲基化的患者的OS也明显比DOK6启动子区低甲基化的患者更长(P=0.036和P=0.031)。多因素分析显示:DOK6启动子区甲基化在非APL及年龄小于60岁的AML患者中是患者总体生存时间的独立影响因素(P=0.052和P=0.043)。5-aza-dC处理白血病细胞株THP-1后DOK6启动子区甲基化水平降低而转录水平升高,且变化在一定范围内(0-10umol/L)均呈浓度依赖性。2.LINC00324在AML中低表达、低甲基化并与白血病细胞株增殖和凋亡相关。非参数检验统计分析表明:无论是在总体AML、non-APL还是正常核型AML(cytogenetically normal AML,CN-AML)患者中,LINC00324的表达水平均明显比对照组低(P<0.001)。在总体AML病例中,LINC00324低表达组较高表达组有更高的血红蛋白(hemoglobin,Hb)含量,差异接近统计学意义(中位数:80.0g/l vs.75.0g/l,P=0.058)。Kaplan-Meier分析发现:LINC00324低表达组在总体AML病例中OS较高表达组更长,差异有统计学意义(P=0.029)。LINC00324在总体AML患者和非APL患者中明显低甲基化(P=0.038和P=0.045)。LINC00324高低甲基化两组在FAB分型中存在差异(P=0.032)。在白血病细胞株HL60和THP1中过表达LINC00324可促进白血病细胞株增殖并抑制其凋亡。结论:1.DOK6低表达及启动子区高甲基化水平是初诊AML患者中的常见分子事件且与AML患者总体生存时间显著相关。2.在白血病细胞株THP-1中,DOK6的转录水平部分受其启动子区甲基化调控。3.LINC00324低表达及启动子区低甲基化水平是初诊AML患者中的常见分子事件,并且LINC00324表达水平不依赖其启动子区甲基化状态的调控。4.LINC00324在白血病细胞株中起到促进增殖和抑制凋亡发生的作用。