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目的本研究在中医活血法基础上对脊髓损伤大鼠给予头顶一颗珠治疗,并观察其治疗效果,通过检测Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达情况,以探讨头顶一颗珠对神经元保护作用的发生机制。方法150只SD雄性大鼠,随机分为5组:假手术组、模型组、TTM低剂量组、TTM中剂量组、TTM高剂量组,每组30只。模型组和药物干预组用改良Allen’s重物打击法制备脊髓损伤模型,假手术组不损伤脊髓。药物干预组每天给予TTM低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量灌胃,假手术组和模型组每天给予生理盐水灌胃,每天一次。于术后1、3、7天进行行为学Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分;苏木精-伊红染色法及尼氏染色法观察脊髓组织形态学变化,酶联免疫吸附实验检测过氧化脂质产物MDA和抗氧化酶SOD的变化;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot,WB)检测Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1蛋白的表达情况。结果1 SD大鼠术后行为学评分:假手术组大鼠在术后1天、3天、7天三个时间段BBB评分均接近于21分。术后第1天,模型组与TTM各干预组之间无差异(p>0.05);术后第3天,TTM高剂量组评分高于模型组(p<0.05);术后第7天,TTM中、高剂量干预组评分均高于模型组(p<0.05)。2脊髓组织镜下观:HE染色结果显示,假手术组大鼠各时间段中脊髓组织结构完整,神经元形态清晰;模型组大鼠脊髓组织内可见炎细胞浸润、神经元胞体缩小、细胞间隙增大。TTM高剂量干预组脊髓结构较完整、炎细胞减少、神经元数量增多。尼氏染色显示,假手术组大鼠各时间段脊髓内神经元结构完整,胞质内尼氏小体数量较多且分布均匀,呈虎斑状。模型组各时相段神经元形态不规则,尼氏小体数量减少、分布不均匀,甚至消失。TTM高剂量干预组在各时间段内神经元细胞形态较好,胞质内尼氏小体数量较多,且分布比较均匀。3大鼠脊髓组织SOD活性和MDA含量检测:TTM干预7天后,ELISA结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠组织内SOD活性降低;与模型组比较,TTM干预各组SOD活性明显提高(p<0.05)。模型组MDA含量升高,且TTM干预后明显降低。4大鼠脊髓组织中Nrf2/ARE信号通路分子表达情况:Western blot检测提示,与假手术组相比,术后各时间段内模型组大鼠脊髓组织中Nrf2、Keap1、HO1、NQO1的表达均升高(p<0.05)。术后第1天,TTM中、高剂量组Nrf2、Keap1表达高于模型组(p<0.05),而TTM高剂量组HO1、NQO1表达高于模型组(p<0.05);术后第3天,TTM中、高剂量组Nrf2、Keap1、HO1、NQO1表达均高于模型组(p<0.05)。术后第7天,TTM低、中、高剂量组Nrf2、Keap1、HO1、NQO1表达均高于模型组(p<0.05)。结论TTM干预可减轻脊髓损伤模型大鼠继发性反应、改善SCI大鼠下肢运动功能,可能与上调Nrf2/ARE信号通路相关蛋白Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1的表达、提高抗氧化酶SOD活性、减少过氧化脂质产物MDA的产生,进而抑制氧化应激反应有关。