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睾丸支持细胞（sertoli cell）被认为是生精细胞的支架细胞，能够为生精细胞提供必需的营养物质，并且合成和分泌雄激素结合蛋白，为生精细胞提供高浓度的雄激素环境，对精子发生发挥着重要的作用。因此，研究睾丸支持细胞的体外培养与生物学特性，不仅对支持细胞潜在的功能研究提供基础，而且对雄性不育、器官移植以及转基因动物生产等问题的解决开辟了广阔的前景。本研究首先利用组合酶消化法分离出犊牛睾丸支持细胞，并采用差速贴壁法对支持细胞进行纯化，进一步通过免疫细胞化学和分子标记检测技术对支持细胞纯度进行了鉴定；对不同血清浓度条件下支持细胞的培养特性进行了分析；此外，本研究采用MTT提取比色方法对支持细胞的体外增殖特性进行了分析比较；通过克隆扩增出牛DAZL基因并构建其真核表达载体pEGFP-N3-DAZL，采用脂质体介导使其转染至睾丸支持细胞，利用Real-time PCR技术检测支持细胞中过表达DAZL后精子发生相关基因的表达变化，并通过G418筛选稳定过表达DAZL的细胞株。本研究为阐明支持细胞的体外培养特性及生物学应用前景奠定基础，主要研究结果如下：（1）利用组合酶法可以对犊牛睾丸支持细胞进行分离纯化，支持细胞在体外培养条件下能够传至第20代，并且随着传代次数的增加，支持细胞的增殖速度越来越慢。（2）2%浓度血清的培养基能够用于犊牛睾丸支持细胞的体外培养。（3）利用免疫组化及RT-PCR技术对体外培养的犊牛睾丸支持细胞进行了有效的鉴定，其纯度为95%以上；利用AKP染色对生精细胞进行了初步鉴定。（4）由细胞生长曲线可以发现，第1~3代睾丸支持细胞按3.5×10~4个/ml的密度接种，能够获得较好的增殖效果。（5）本试验成功构建出带绿色荧光蛋白标记的牛DAZL真核表达质粒pEGFP-N3-DAZL。（6）支持细胞内瞬时过表达DAZL显著上调BOULE和TPX1基因的表达（P<0.05），而CDC25A、DDX4和TSSK3基因mRNA的表达没有显著性变化。（7）本研究筛选得到稳定表达DAZL的支持细胞的克隆。