【摘 要】
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金银花(Lonicera japonica)、半夏(Pinellia ternata)与大蒜(Allium sativum L.)都是具有抗菌抗病毒药用价值的中草药植物,是筛选抗性基因的理想材料。噬菌体(Bacteriophage)对于维持生态系统的动态平衡起到非常重要的作用,它广泛存在于适合其宿主菌生存的泥土、污水和空气等自然环境中,其结构简单且基因数少,在分子生物学及基因工程领域中是一种良好的
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金银花(Lonicera japonica)、半夏(Pinellia ternata)与大蒜(Allium sativum L.)都是具有抗菌抗病毒药用价值的中草药植物,是筛选抗性基因的理想材料。噬菌体(Bacteriophage)对于维持生态系统的动态平衡起到非常重要的作用,它广泛存在于适合其宿主菌生存的泥土、污水和空气等自然环境中,其结构简单且基因数少,在分子生物学及基因工程领域中是一种良好的试验系统。本研究以噬菌体作为研究植物与病毒互作的模式生物,利用其从构建的基因文库中筛选抗病毒基因,并研究抗性机制,力图通过基因工程技术将抗性基因应用于抗病品种的培育等领域。从植物中筛选鉴定抗线虫基因的研究对线虫的生物防治具有重要价值,并对进一步揭示植物与线虫的共进化过程具有借鉴意义。一方面,我们利用双层板法从土壤中分离到了一株以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌的噬菌体,从双层板噬菌斑的尺寸和侵染宿主菌的速度观察得知,分离到的噬菌体为一种温和噬菌体。在噬菌体基因组酶切片段测序分析中,没有比对到同源性较高的噬菌体,因此,我们将其暂定为一株疑似新的噬菌体。但其是否真的为一株新发现的噬菌体,还需要进一步鉴定分析。本研究还采用了同样的鉴定方法成功鉴定了一株枯草芽孢杆菌噬菌体,同源性比对结果显示此噬菌体为枯草芽孢杆菌噬菌体Nf。另一方面,我们应用枯草芽孢杆菌表达系统和大肠杆菌表达系统分别构建了金银花cDNA文库和大蒜cDNA文库,另外,还应用后者构建了大蒜基因组文库,以及选用了由本实验室构建的半夏cDNA文库。我们使用了单独筛选与群体筛选两种方法来筛选抗噬菌体基因,通过不断优化探索,达到了降低文库中基因突变的概率并提高筛选效率的目的。为排除噬菌体的烈性程度对筛选结果的影响,我们选用了不同特性的噬菌体进行了一系列探索研究。在大量尝试的基础上,最终建立了理想的筛选方法,它在一定程度上降低了基因突变概率和提高了筛选效率。研究中还利用了模式生物秀丽隐杆线虫具有对气味和味道敏感的特性,通过线虫取食偏好性测定与线虫后代数量培养的方法,初步探究了以大肠杆菌为表达系统的大蒜文库中基因表达产物对线虫的影响。结果分析认为有些基因的表达产物可以影响线虫的取食偏好性选择,其产生的气味可以使线虫逃避对这些基因的取食,但并不一定影响线虫的产卵能力。
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