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目的：本文主要有三个目的：1）构建胸腺素β4真核表达载体以用于基因靶向治疗；2）构建α肌球蛋白重链启动子驱动报告载体以用于示踪成体干细胞向心肌分化；3）探索能靶向缺血心肌血管的靶向子MI1对骨髓间充质干细胞进行表面修饰的最适浓度。方法：1）利用pBlast49、pcDNA3.0-Flag、pIRES2-eGFP三种载体构建能在真核细胞表达胸腺素β4的表达载体，并将这三种重组子转染到293T、293F、HUVEC三种细胞中，并通过Real-time PCR、Western Blot及Elisa三种方法检测胸腺素β4的表达情况；2）利用α肌球蛋白重链的启动子特异性驱动增强型绿色荧光蛋白以构建心肌特异性报告载体。在新生鼠心肌细胞内确定该报告载体的心肌组织特异性。将该报告载体经电转转染入大鼠骨髓间充质干细胞内，经诱导向心肌分化，然后通过是否表达绿色荧光蛋白，及使用三型心肌肌钙蛋白I的免疫荧光确认向心肌分化，以确定经构建载体可用性；3）使用50、250、500、1000、1500μg/mL的能靶向缺血心肌血管的靶向子MI1对骨髓间充质干细胞进行表面修饰，并对MI1表面修饰的骨髓间充质干细胞的贴壁，增殖，及靶向骨髓间充质干细胞至缺血心肌的能力进行研究。结果：1）所构建的三种胸腺素β4真核表达重组子基因序列与目的基因完全匹配，Real-time PCR结果提示：经转染该三种载体的真核细胞（293T、293F、HUVEC），其胸腺素β4mRNA表达水平呈明显的上调。且经转染构建的pIRES2-Tβ4-eGFP载体的阳性细胞，其绿色免疫荧光的强度明显高于转染空载体对照细胞。利用构建胸腺素β4与Flag标签蛋白融合表达载体转染的293F细胞总蛋白的WesternBlot证明：转染pcDNA3.0-Tβ4-Flag质粒的细胞裂解物的标签蛋白呈阳性，提示：经转染的胸腺素β4基因在基因与蛋白水平均被表达；2）经α肌球蛋白重链启动子驱动报告载体转染的新生鼠心肌细胞内能观察到绿色荧光蛋白阳性细胞。经α肌球蛋白重链启动子驱动报告载体转染的骨髓间充质干细胞，经向心肌分化诱导，能观察到绿色荧光蛋白阳性细胞，且阳性细胞数量与表达心脏特异性三型心肌肌钙蛋白I的细胞数量基本一致，提示：经构建的α肌球蛋白重链启动子驱动的荧光报告载体能示踪干细胞向心肌分化；3）经50和250μg/mL浓度的MI1表面修饰的骨髓间充质干细胞能正常贴壁及增殖，但培养72h后，大部分细胞凋亡。而经浓度大于250μg/mL的MI1表面修饰的骨髓间充质干细胞，大部分细胞不能常贴壁及增殖。体内研究发现：经静脉使用，有部分经MI1表面修饰的骨髓间充质干细胞能靶向缺血心肌。结论：1）所构建的胸腺素β4表达载体能在经转染真核细胞表达；2）所构建的α肌球蛋白重链启动子驱动的荧光蛋白报告载体能示踪干细胞向心肌分化；3）使用MI1靶向子对细胞进行表面修饰，其合适浓度约为50μg/mL。