PRRSV HuB1株的分离鉴定及甘草酸体外抗PRRSV感染的研究

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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。PRRS自1987年首次报道发现于美国以来,现已遍及世界各主要养猪国家与地区,并已成为危害养猪业最严重的传染病之一。在2006年春夏交接之际,我国的南方地区发生了以高热、高发病率和高死亡率为特征的猪病,而后迅速蔓延至周边地区,至2007年已遍及全国绝大部分省份。目前普遍认为该疫情是由高致病性PRRSV变异株及其他病原微生物混合感染并在高温高湿等诱因条件下所致。1本研究用Marc-145细胞于2006年从湖北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪场分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为HuBl。2采用RT-PCR、IFA方法对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖、TCID50的测定和理化性质的鉴定。3通过对PRRSV HuBl株的ORF5序列的比对,发现其与PRRSV标准毒株及其它毒株的同源性在85.6-99.5%之间,证明分离的毒株为PRRSV.4利用RT-PCR方法和核甘酸序列测定,证明了PRRSV HuBl株的NSP2基因具有PRRSV变异毒株的分子特征。5通过纳米化甘草酸体外与PRRSV相互作用的研究,证明了纳米化甘草酸具有抗PRRSV感染细胞的能力,并且随着病毒TCID50的降低,其有效作用浓度也降低,具有剂量依赖性。纳米化甘草酸半数有效抑制浓度分别为:PRRSV 105TCID50,174μg/ml; PRRSV 104TCID50,141μg/ml; PRRSV 103TCID50,37.9μg/ml; PRRSV 102 TCID50, 8.84μg/ml。6利用荧光定量PCR方法,初步证明了纳米化甘草酸不能破坏PRRSV的RNA,有可能损坏病毒的囊膜蛋白,或与病毒的囊膜蛋白结合,阻断病毒囊膜特异性地与宿主细胞上的配体相结合,使PRRSV不能吸附在宿主细胞膜表面,从而使PRRSV失去了侵染宿主细胞的能力。
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