荷叶总生物碱提取、纯化及生物活性研究

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荷叶是一种既是食品又是药品的天然植物原料,现代研究发现生物碱类成分是荷叶主要生理活性物质之一。本论文通过对荷叶总生物碱提取、纯化工艺及其清除活性氧、抗菌、抗病毒作用的研究,进一步明确其所含生物碱类成分与生理活性之间的关系。主要结果如下:1.采用酸水提取荷叶总生物碱,以酸性染料比色法为分析手段,确立了总碱提取的最佳方法:微波辅助的热回流提取法;通过正交试验得到了最佳提取条件:pH 2.5盐酸溶液、固液比1:40、中火微波辐射2.5分钟、提取4小时,总生物碱提取量为273.94μg/g。2.采用大孔吸附树脂法富集纯化荷叶总碱,通过对九种大孔吸附树脂进行考察筛选,确定了A型大孔吸附树脂为最佳树脂;其纯化工艺为最佳吸附条件:上样液pH 10、NaCl浓度1mol/l、吸附流速2.5BV/h,最佳洗脱条件:pH 3的50%乙醇、洗脱流速1.5BV/h。纯化产品经HPLC检测含有8种生物碱,其中荷叶碱含量为1.37%。3.采用化学发光法测定荷叶总碱清除O2·-、·OH、H2O2的能力,结果表明总碱对3种氧自由基的清除能力大小IC50分别为305μg/mL、50μg/mL、3700μg/mL,其清除·OH的能力最强,显示了较强的抗氧化活性。4.采用杯碟法研究荷叶总碱的抗菌作用,采用对倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),结果表明总碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌、变形杆菌均有抑制作用,抑菌效果明显优于黄连素(1%),与林可霉素(5%)相当;其MIC为0.312~2.50mg/mL,MBC为0.625~5.00 mg/mL。5.采用常规方法测定荷叶总碱抗鸡新城疫病毒(NDV)的作用,结果表明荷叶总碱有一定的抗NDV作用,其TD0、TD50、IC50和TI分别为6.25 mg/mL、13.86mg/mL、1.53 mg/mL和9,以先接种病毒后加药物的方式及病毒和药物体外作用2h后再同时加入的方式抗病毒效果较好。
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