【摘 要】
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MicroRNA(miRNA)是一类非编码的小RNA(Small RNA),通过调节其靶基因的表达来影响植物的生长发育进程。一些miRNA在植物逆境胁迫的适应方面发挥着重要的作用。本试验通过对获
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MicroRNA(miRNA)是一类非编码的小RNA(Small RNA),通过调节其靶基因的表达来影响植物的生长发育进程。一些miRNA在植物逆境胁迫的适应方面发挥着重要的作用。本试验通过对获得的8个转miR156过表达白桦株系为对象,探讨miR156对白桦生长发育及抗性的影响。主要研究包括:1.对已获得的8个转基因株系进行分子检测,确认其已经整合到白桦基因组中并正常表达;转基因叶片变小,叶缘锯齿变浅,叶基角变大,苗高变低,地径变细,侧枝增多且变粗,IAA和GA3含量升高。2.抗病试验中发现:转基因株系叶片的病斑数明显小于非转基因对照株系,转基因株系SOD、POD、PPO、PAL、CAT的活性都显著高于非转基因对照株系的活性,同时测定了相关抗病基因的表达量,转基因株系中MYB106、MYB61、RPP13、RPM1的表达量与非转基因对照株系相比均上调表达。3.0.4%NaCl处理12 d后,转基因株系的盐害指数达到60%,而对照株系仅19%,且复水后的相对生长量小于对照株系;并对胁迫处理过程中各株系的SOD活性、MDA含量及H202含量进行了测定,发现:随着胁迫开始后,转基因株系中SOD的含量不断降低,且转基因株系中SOD的含量明显低于非转基因对照株系;H202含量表现为随着盐害胁迫时间的延长,转基因及对照株系中含量的不断上升,且转基因株系中H202的含量高于非转基因对照株系;随着盐害胁迫的时间不断增加,转基因株系中MDA含量明显高于非转基因株系。4.建立了转基因及对照株系的叶、嫩茎及木质部转录组表达谱,3个组织部位的差异表达基因分别为1571、845和2325条。生长素合成及信号转导途径、GA3合成途径、细胞周期、侧枝发育、防御机制等途径相关基因发生变化。通过对BpmiR156的靶基因定量分析预测,发现在白桦不同部位的SPL基因表达量不同,在转基因株系的叶片中,所有SPL基因都显著下调;在转基因株系顶芽中BpSPL1、BpSPL6、BpSPL9、BpSPL11、BpSPL12 显著下调;嫩茎中 BpSPL1、BpSPL6、BpSPL8、BpSPL9、BpSPL11、BpSPL12、BpSPL15显著下调,其中BpSPL1、BpSPL9下调;在腋芽中BpSPL1、BpSPL6、BpSPL8、BpSPL11、BpSPL14、BpSPL15表达量都显著下调。
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