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缺血性脑卒中(Ischemic Stroke,IS)严重威胁我国中老年人健康,且近年该病发病率和死亡率逐年上升。救必应酸是从中药材中提取得到,研究发现其具有降血脂、治疗IS的药理活性,中药材资源丰富、药理活性显著,具有开发价值。救必应酸单体药物开发过程中,建立高效、准确的方法测定药材精制品以及单体成分的含量对药品安全性、有效性十分关键。生物标志物在IS疾病的防治中具有重要意义,目前已有的生物标记物在缺血急性期内血浆浓度低,检测灵敏度、特异性有待进一步提高。本文利用多反应监测方法(Multiple Reaction Monitoring,MRM)采集IS病人血浆中载脂蛋白A1(Apolipoprotein A1,APOA1)和转铁蛋白(Transferrin,TF)的特异性肽段(Unique peptide,UP)数据,并根据医学统计方法分析APOA1-UP和TF-UP水平与IS发生的相关性。良好的生物标志物可作为疾病疗效评价指标之一,在救必应药材开发中为药效机制研究提供重要信息。本论文研究内容与结果主要如下:1)优化的HPLC方法能同时测定救必应药材及其精制物中紫丁香苷、长梗冬青苷、救必应酸3种主要活性成分。方法学验证显示精密度、重复性、线性、平均加样回收率良好,可用于救必应药材及其精制品的质量控制,为救必应酸药物开发提供了实验基础。2)通过基于三重四级杆质谱(Triple Quadrupole Mass Spectrometry,TQ-MS)的多反应监测-标记参考肽段方法(Multiple Reaction Monitoring-Labeled Reference Peptide,MRM-LRP)方法对APOA1-UP、TF-UP进行相对定量分析。统计发现APOA1-UP、TFUP水平与IS发生存在负相关,即随着APOA1-UP或TF-UP血浆水平降低,IS发生可能性升高。APOA1-UP/LRP的最优临界值为1.8031。对应的曲线下面积(Area Under The Curve,AUC)为0.9750,灵敏度和特异性分别为90.63%和97.14%。TF-UP/LRP最优临界值为0.6317,对应的AUC是95.65%,灵敏度和特异性分别为91.49%和88.57%。APOA1-UP、TF-UP水平均具有较好的IS疾病诊断能力。结论:建立的HPLC法简单可靠,为救必应药材及其精制品的质量提供了快速的评价方法。APOA1-UP、TF-UP是较好的IS生物标志物候选物,但仍需通过扩大临床样本量、研究生物标志物在疾病发生发展中的作用机制进一步确证其临床应用的有效性。本课题的研究为救必应酸单体药物开发的质量控制和药效机制的研究提供了实验基础。