CD16/CD64-BB-ζ基因修饰的NK-92MI细胞联合抗体治疗增强对肿瘤细胞的杀伤能力

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为了探讨在Rituximab(CD20抗体)存在的情况下,高亲和力FcγRⅠ(CD64)基因修饰的NK-92MI细胞(CD64-BB-ζNK-92MI)与低亲和力FcγRⅢa(CD16)基因修饰的NK-92MI细胞(CD16-BB-ζNK-92MI)以及未被基因修饰的NK-92MI细胞相比,是否可以提高对CD20阳性非霍奇金性淋巴瘤细胞的杀伤率。我们通过基因合成和分子克隆手段构建CD16-BB-ζ,CD64-BB-ζ片段,将CD16-BB-ζ,CD64-BB-ζ片段克隆到慢病毒载体上,然后用浓缩后的慢病毒对NK-92MI细胞进行转染。利用流式细胞术检测目的蛋白在NK-92MI细胞上的表达,通过流式细胞仪分选获得稳定细胞株NK-92MIhCD16和NK-92MIhCD64。最后用流式细胞术检测NK-92MI、NK-92MIhCD16和NK-92MIhCD64细胞联合Rituximab对肿瘤细胞的杀伤效果。效靶比设置为2:1,在不添加Rituximab时,未被基因修饰的NK-92MI细胞对CEM,Jurkat细胞的杀伤效率分别为7.6%,16.2%;而CD16-BB-ζ基因修饰的NK-92MI细胞对CEM,Jurkat细胞的杀伤效率分别为6.5%,15.87%;CD64-BB-ζ基因修饰的NK-92MI细胞对CEM,Jurkat细胞的的杀伤效率分别为7.8%,16.63%,在统计学上没有显著性差异。在添加Rituximab时,未被基因修饰的NK-92MI细胞对CD20阳性的MAVER-1,Raji细胞的杀伤效率分别为34.17%,56.2%;CD16-BB-ζ基因修饰的NK-92MI细胞对上述两种肿瘤细胞的杀伤效率分别为81.47%,65.73%;CD64-BB-ζ基因修饰的NK-92MI细胞对上述两种肿瘤细胞的杀伤效率分别为78%,62.37%,在统计学上具有显著性差异。因此,我们得到结论:在添加Rituximab时,经CD16-BB-ζ,CD64-BB-ζ基因修饰的NK-92MI细胞可特异性识别CD20分子,对CD20阳性的非霍奇金性淋巴瘤的杀伤效率显著高于未被基因修饰的NK-92MI细胞,显示出CD16-BB-ζNK-92MI以及CD64-BB-ζNK-92MI细胞联合抗体治疗在肿瘤免疫治疗中发挥的的巨大潜力。
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