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缺血性中风是由脑血流供应障碍引起缺血(氧)、局限性脑缺血性坏死或脑软化的疾病,其中缺血性中风患者约占各种中风患者的43%~65%。柿叶为柿树科柿树属植物柿(Diospyros kaki Thunb.)的叶,性味苦,酸,涩,凉,含有黄酮、酚酸、三萜、香豆素等多种化学成分,可用于缺血性中风的治疗。目前通过民间验方制成的柿叶制剂对缺血性中风具有很好的疗效,安全性较高,但由于该制剂是上个世纪80年代研制、近年来才上市的中药品种,生产工艺落后,技术水平低下,在国际市场上缺乏竞争力,同时治疗缺血性中风药效成分尚不清楚。为此,本研究对其治疗缺血性性中风的有效部位进行了药效筛选研究,并对有效部位的制备工艺进行研究。旨在开发出治疗缺血性中风的中药五类新药。具体研究工作如下: 1.药材质量标准研究: 本研究首次以金丝桃苷、异槲皮苷为指标成分,建立了柿叶药材的质量标准研究,建立方法具有分离效果好,灵敏,准确等优点,可作为柿叶药材含量测定的方法。 2.柿叶治疗缺血性中风有效部位的筛选 采用70%乙醇提取得到柿叶提取液,减压浓缩得无醇水液,采用三氯甲烷萃取得到三氯甲烷层和水层,三氯甲烷层浓缩,通过凝胶树脂纯化得总三萜部位,水层通过AB-8大孔树脂水-乙醇梯度洗脱,通过指纹图谱检测各流份,制备得到总酚酸、总黄酮以及其他成分几个部位。对不同部位进行药效筛选,以运动评分、抓力、脑水肿、脑梗死、MDA、SOD六项指标评价柿叶有效部位的强度。实验结果表明柿叶总黄酮部位为治疗缺血性中风的有效部位。 3.提取工艺研究 采用HPLC法,以槲皮素、山奈酚的平均转移率和出膏率为评价指标,对溶剂(A)、提取时间(B)、提取次数(C)三个因素进行了考察,采用L9(34)正交试验表安排实验,综合评分,对柿叶总黄酮的提取工艺进行了研究,确定柿叶的最佳提取工艺。 4.纯化工艺研究 对柿叶总黄酮部位纯化工艺进行了研究。考察浓缩倍数,pH对柿叶初步纯化的影响,通过对不同型号的大孔吸附树脂进行筛选,优选DM-130型大孔吸附树脂作为柿叶的纯化树脂,并对树脂进行了纯化工艺研究,考察树脂的最大上样量、上样体积流量、洗脱的溶剂体积分数,对确定的纯化工艺进行了验证。再结合萃取工艺得到纯度为50%以上符合中药五类新药申报要求的的样品。