论文部分内容阅读
真武汤是由附子、芍药、白术、茯苓、生姜五味中药按3:3:2:3:3比例组成的复方,临床应用颇为广泛,因其强心疗效显著,是治疗心衰的重要方剂之一。目前,对真武汤的研究主要集中在药理活性和临床应用方面,有关物质基础的研究还不足,因此研究真武汤提取工艺,检测其化学成分,有助于明确其活性成分,从而阐明其物质基础,为期更深入的研究奠定基础。目的:鉴于其在治疗心衰方面有广泛临床作用,本课题基于真武汤的心衰治疗的指标性成分优选真武汤的最佳提取工艺,为提高其临床效用提供帮助。通过组建真武汤五味组成药材附子、茯苓、白术、芍药、生姜的化学成分信息库,应用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱（UPLC/Q-TOF-MS）对中药及复方进行检测,应用UNIFI分析平台全面地对真武汤进行化学成分定性分析。方法:（1）本课题以干膏率、乌头碱、芍药苷、白术内酯Ⅲ、去甲乌药碱含量等作为指标进行综合考察,因为指标成分中乌头碱为毒性成分,其含量以低为好,而干膏率及其他有效指标含量以高为优,所以本实验采用综合评分:即在传统评分基础上使用减法来对乌头碱进行评分,通过单因素试验进行考察,根据结果取A加水量、B提取次数、C提取时间3个因素,每个因素3个水平正交试验设计优选最佳提取工艺参数。（2）本课题采用UPLC/Q-TOF-MS进行真武汤及其组方的样品进行检测,使用UNIFI软件对其结果进行定性分析。首先,选择C18反相色谱柱,ACQUITY UPLC CSH C18（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长230 nm,柱温40℃,流速0.2 mL/min,进样量10μL,建立了真武汤的UPLC色谱图的色谱方法;其次,联用四级杆飞行时间质谱（Q-TOF-MS）分别在正、负离子模式下对其进行检测,获得各成分的精确分子量和分子式;最后,通过UNIFI软件分析质谱图,分析各成分的裂解信息,结合文献对真武汤的化学成分进行分析与鉴定。结果:（1）本课题确定最佳提取工艺因素组合为A3B2C3,即:加10倍量水、煎煮2次、提取时间2h。（2）本课题通过鉴定了真武汤中71种可能的成分,详细阐明了其中21个化合物的一级二级质谱图和质谱裂解途径,其中有2个来源于附子,4个来源于茯苓,2个来源于白术,5个来源于白芍,8个来源于生姜。（3）通过全面分析真武汤提取液、真武汤含药血清以及空白血清的质谱图,鉴定真武汤给药大鼠血浆中原型成分21个。结论:本课题成功优选出最佳提取工艺参数,并采用UPLC/Q-TOF-MS联用技术开展了真武汤化学成分的分析鉴定研究,全面的阐明了真武汤的化学组成,为探明真武汤的药效物质基础,对真武汤进一步的研究提供科学依据。