牛病毒性腹泻病毒（BVDV）为黄病毒科，瘟病毒属成员，是一种在世界范围内对造成家畜健康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛病毒性腹泻病毒（BVDV）与猪瘟病毒和羊边界病毒在血清学上有交叉反应。目前为止，还没有有效的预防和控制BVDV的措施，因此急需研制出新型理想的疫苗防制该病。本研究主要包括以下两个部分内容：根据Genbank上公布的牛病毒性腹泻病毒NVDL株E2基因的序列，设计引物并进行扩增，回收纯化PCR产物，克隆到pMD19-T载体中，将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pVAX1上，成功构建了含有牛病毒性腹泻病毒E2基因的真核表达载体pVAX1-E2.通过脂质体介导重组质粒转染293T细胞，经Western blot证实E2基因可在293T细胞中表达。随后将重组核酸疫苗肌肉注射免疫小鼠，检测一免、二免、三免的小鼠血清中和抗体效价，以及三免后的小鼠淋巴细胞增殖情况。同时将重组质粒联合基因佐剂pVAX1-IL-2免疫小鼠，ELISA检测结果表明，E0组有效的诱导特异性血清抗体的产生，而E2组效果不明显。MTT检测显示两组均大大促进了特异性淋巴细胞的增殖，且E2组效果好于E0组。对GenBank发表的牛病毒性腹泻病毒NVDL株E0、E2基因序列进行优化，设计引物，扩增出目的基因，定向克隆到原核表达载体pET系列中，构建原核表达载体pET-28a-E0/pET-30a-E2，转化原核表达宿主菌，用IPTG诱导表达，并确定表达的最佳诱导时间和温度，通过聚丙烯酞胺凝胶电泳和蛋白印迹分析确定，表达的蛋白能与BVDV阳性血清发生特异性反应。用纯化后的蛋白免疫小鼠，经ELISA检测和MTT实验，两蛋白组与对照组相比，均产生了显著地的差异，且E2组效果好于E0组。