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本试验以香蜂花(Melissa officinalis)带芽茎段为材料,比较系统地进行香蜂花茎段培养与快繁技术研究,摸索香蜂花试管苗工厂化生产模式的基本参数,并系统地研究了香蜂花试管苗玻璃化的影响因素;同时,以香蜂花种子、叶片和茎段为材料,进行愈伤组织培养与植株再生研究。最后,利用GC-MS技术分析香蜂花试管苗和盆栽实生苗的挥发油成分差异,以期为香蜂花离体培养建立有效途径,为香蜂花大规模工厂化试管育苗及种质资源保护提供科学依据。主要研究结果如下:1.香蜂花带芽茎段的培养。以香蜂花带芽茎段为材料,研究了香蜂花带芽茎段培养和离体繁殖。结果表明:3月取香蜂花带芽茎段经过75%乙醇30s+0.1%HgCl2 5 min处理为最佳取材时期和消毒方式;带芽茎段在MS+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基中不定芽诱导率达到100.0%;不定芽适宜增殖的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1mg/L IBA,增殖倍数达到4.6;最佳的生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L IBA,生根率达到100.0%;适宜的移栽基质为1:1:1珍珠岩:蛭石:河沙,成活率为93.3%。2.香蜂花试管苗工厂化生产模式的确定。香蜂花工厂化试管育苗主要技术参数:继代增殖系数4.5,每25 d继代1次,一年可增殖继代12代,生根率100.0%,移栽成活率93.3%。以此为参数,离体培养时污染率控制在5%以下,玻璃化苗控制在5%以下,理论上香蜂花1个芽1年继代12次既可增殖403.8万株,可以达到快繁的要求。3.香蜂花试管苗玻璃化现象的研究。以香蜂花正常试管苗的带芽茎段为材料,针对6-BA浓度、温度、培养器皿、继代时间、蔗糖浓度和琼脂浓度等影响因素,研究了香蜂花带芽茎段培养过程中控制玻璃化现象的措施。结果表明:香蜂花正常试管苗的适宜培养的6-BA浓度为0.5-2.0 mg/L,30g/L蔗糖和7g/L琼脂的培养基中玻璃化率为最低。试管苗培养于玻璃瓶+塑料膜的培养容器内,置于25℃培养温度,30 d继代培养一次时可有效地控制玻璃化发生。4.香蜂花愈伤组织的培养。以香蜂花种子、叶片、叶柄、茎段为材料,研究了香蜂花愈伤组织的培养。结果表明:香蜂花种子最佳的消毒方式为75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 5 min,于MS培养基中萌发率达到85.5%;愈伤组织最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D,诱导率达97.1%;香蜂花不同取材部位(叶片,叶柄,茎段)的愈伤组织诱导率差异不显著,不同取材部位均可达到极高的愈伤诱导率;愈伤组织最佳增殖的培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+0.2 mg/L 2,4-D,增殖率达到76.7%;在培养基MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L 2,4-D上部分愈伤组织可以分化芽苗。5.香蜂花试管苗挥发油成分的气相色谱-质谱(GC-MS)分析。以香蜂花试管苗为材料,利用GC-MS技术共分离出19种物质,主要成分为甲基庚烯酮、香茅醛、橙花醇、β-柠檬醛、香叶醇、α-柠檬醛、乙酸橙花酯、二丁基羟基甲苯、绿花白千层醇等。与香蜂花盆栽实生苗相比,两样本共测定出11种相同物质,虽然各成分的含量存在一些的差异,但其中主要物质成分橙花醇、β-柠檬醛、香叶醇和香叶醛在两样本中含量都很大,表明香蜂花试管苗可以应用于种苗快繁。