毛竹生长快、可再生能力强,是我国重要的笋、材两用竹种,具有巨大的经济、社会和生态价值。自然条件下,毛竹开花周期长,开花时间和空间不可预知,且花后死亡,采用常规方法对其进行遗传变异和育种改良有较大的难度。研究毛竹相关成花基因的结构、功能和表达,探讨其在开花路径中的作用,利用基因工程方法缩短其成花周期,不仅消除开花周期长给其杂交育种工作带来的障碍,还对毛竹开花机理的研究提供理论支持。用RT-PCR的方法从毛竹幼穗中克隆到PheEMF2和PheTFL1基因。PheEMF2基因ORF长1821bp,编码606个氨基酸。PheEMF2蛋白含有保守的C2H2型锌指结构和VEF-box结构域,属于PcG（Polycomb group）蛋白家族的EMF2亚类。构建pET30a-PheEMF2原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,IPTG诱导后得到大小在72 kD左右的融合蛋白。构建pCAMBIA2300-PheEMF2植物过表达载体,转化根癌农杆菌后侵染拟南芥,筛选到2个转基因系PEMF2-1/2,两个转基因系表现出相同的表型——花期延迟。PheTFL1基因ORF长522bp,编码173个氨基酸。PheTFL1蛋白含有保守的D-P-D-X-P模块、G-X-H-R模块、His88和Asp144残基以及三联体模块END,属于PEBP蛋白家族的TFL1亚类。构建35S::PheTFL1:YFP亚细胞定位表达载体,在拟南芥原生质体中进行瞬时表达。激光共聚焦显微镜观察结果显示PheTFL1::YFP融合蛋白在细胞质和细胞膜上的有较强的荧光信号。构建植物表达载体pCAMBIA2300-PheTFL1,转化拟南芥,转基因拟南芥无观测到显著表型。构建pET30a-PheTFL1原核表达载体,诱导其表达得到大小约21 kD的融合蛋白,该蛋白有部分可溶性,但是大部分还是以包涵体的形式存在于细胞质中。将用变性镍柱纯化到的原核表达蛋白免疫大白兔获得抗体,ELISA反应测定其抗体的效价,效价为1:51200。用RACE技术从毛竹幼穗中克隆到PheFT基因,其ORF长540bp,编码179个氨基酸。PheFT蛋白含有保守的D-P-D-X-P模块、G-X-H-R模块、Tyr85和Gln140残基和高度保守的LYN三联体模块,属于PEBP蛋白家族的FT亚类。构建35S::PheFT:YFP融合表达载体,拟南芥原生质体瞬时表达结果显示PheFT::YFP融合蛋白在细胞质、细胞膜和叶绿体上有较强的荧光信号。构建pET30a-PheFT原核表达载体,诱导后得到大小约为26kD的蛋白,该蛋白基本不可溶。将用常规包涵体纯化法纯化到融合蛋白免疫大白兔获得抗体,其抗体的效价与PheTFL1抗体相同。根据拟南芥中表达相对稳定的持家基因ACT2、EF1α、GAPDA、TUA、TUB、UBC18、PP2A和UBQ的序列在基因库中搜索毛竹同源基因作为本研究的候选基因。通过qRT-PCR的CT值分析毛竹9个候选基因在实生苗、开花竹株及未开花竹株各组织器官中的表达稳定性。综合geNorm程序分析和NormFinder统计分析的结果,选择在毛竹不同组织器官中表达相对稳定的PP2A作为内参基因。结果显示PheEMF2基因只在幼嫩未成熟的小花中高度表达,而PheTFL1在幼嫩未成熟的小花和幼嫩营养器官中表达量较高,PheFT基因在开花竹叶片和枝中表达较高。虽然PheTFL1和PheFT是同源基因,但在各组织器官中的表达却不同。