【摘 要】
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本研究旨在观察低温胁迫下黑龙江地区蛙科代表物种东北林蛙（Rana dybowskii）和黑斑侧褶蛙（Pelophylax nigromaculatus）组织器官可溶性蛋白的适应性变化,初步探讨其耐低温机制,为进一步揭示两栖类低温生物学和比较生理学提供一定的理论参考和实验依据。本实验采用不同温度（室温、4℃、-2℃）对东北林蛙和黑斑侧褶蛙雄性成体进行低温诱导,采用PAGE电泳技术观察骨骼肌及心肌可溶
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本研究旨在观察低温胁迫下黑龙江地区蛙科代表物种东北林蛙（Rana dybowskii）和黑斑侧褶蛙（Pelophylax nigromaculatus）组织器官可溶性蛋白的适应性变化,初步探讨其耐低温机制,为进一步揭示两栖类低温生物学和比较生理学提供一定的理论参考和实验依据。本实验采用不同温度（室温、4℃、-2℃）对东北林蛙和黑斑侧褶蛙雄性成体进行低温诱导,采用PAGE电泳技术观察骨骼肌及心肌可溶性蛋白质的变化、2-Dnative-PAGE/SDS-PAGE电泳观察东北林蛙和黑斑侧褶蛙骨骼肌蛋白的适应性变化。 实验结果显示:在室温（14℃）及4℃水环境下,东北林蛙与黑斑侧褶蛙72h存活率均为100%;-2℃环境24h,东北林蛙存活率为100%,黑斑侧褶蛙存活率为80%。 胶浓度为6%的东北林蛙和黑斑侧褶蛙骨骼肌可溶性蛋白PAGE电泳效果良好。其中,东北林蛙和黑斑侧褶蛙-2℃组和4℃组迁移率Rf=0.86的蛋白（谱带峰面积）均呈显著性上调（P＜0.05）;东北林蛙-2℃组Rf=0.60的蛋白显著性上调（P＜0.05）,4℃组无明显变化。黑斑侧褶蛙-2℃组和4℃组Rf=0.74的蛋白呈显著性下调（P＜0.05）。 胶浓度为10%的心肌可溶性蛋白PAGE电泳效果良好。其中东北林蛙和黑斑侧褶蛙心肌Rf=0.79的蛋白均呈显著性上调（P＜0.05）。Rf约为0.10、0.42和0.84蛋白则均无显著性差异（P＞0.05）。 实验选取10%浓度分离胶进行骨骼肌、心肌可溶性蛋白2-D native-PAGE/SDS-PAGE电泳,观察室温组和-2℃组,结果显示-2℃组东北林蛙和黑斑侧褶蛙的骨骼肌蛋白斑点D（MW=32kDa）均呈显著性下调（P＜0.05）,蛋白斑点E（MW=16kDa）均呈显著性上调（P＜0.05）;-2℃组心肌蛋白斑点A（MW=48kDa）较室温组表现为显著上调（P＜0.05）,D（MW=28kDa）表现为显著下调（P＜0.05）。 上述结果表明,东北林蛙和黑斑侧褶蛙在低温胁迫下部分组织中可溶性蛋白呈现特异性上调和下调表达可能与低温环境的适应性有关。
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