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目的:宫腔粘连常见于人工流产、自然流产刮宫术、产后感染及宫腔手术后,是我国妇女继发性不孕的第二大病因。间充质干细胞移植在损伤修复和疾病治疗方面应用广泛,其中经血源性间充质干细胞(menstrual blood-derived stromal cells,MenSCs)在具有间充质干细胞共性的同时,还具有获取容易、来源丰富以及低免疫原性的特点,在干细胞再生医学领域拥有广阔的发展前景。我们之前的研究结果已经证实了MenSCs对重度宫腔粘连患者以及大鼠宫腔粘连模型的治疗作用,在探究其治疗机制时,我们发现MenSCs可能通过其旁分泌发挥部分的治疗效应。为了进一步探索MenSCs的旁分泌作用,我们用MenSCs来源的外泌体(MenSCs-Exos)治疗大鼠宫腔粘连模型,以观察MenSCs-Exos的治疗效果,并探索其可能的作用机制。研究方法:超速离心法分离提取MenSCs无血清培养上清中的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒追踪分析(NTA)和western blot技术对其进行鉴定,Shotgun法对其进行测序分析;采用机械损伤法建立大鼠模型,造模后大鼠随机分为三组,分别注射PBS、MenSCs和MenSCs-Exos进行治疗;通过组织病理学染色、胶原蛋白表达以及妊娠情况,评价治疗后宫腔粘连大鼠的子宫内膜形态、纤维化沉积以及生育力的改善;通过免疫组化染色检测治疗后子宫内膜上的细胞增殖情况;通过三维成像技术观察MenSCs和MenSCs-Exos在子宫内的分布以及对子宫内膜腺体和血管再生的影响;通过western blot技术检测治疗后子宫内膜容受性蛋白的表达情况。结果:成功分离提取MenSCs-Exos,透射电镜观察MenSCs-Exos呈典型的圆形杯状囊泡样,有完整的膜结构,NTA结果显示粒径大小介于30-150nm之间,western blot鉴定外泌体标志CD63和CD81的表达;MenSCs和MenSCs-Exos经子宫移植后能够显著促进宫腔粘连大鼠内膜再生,增加其腺体数量,减少胶原纤维沉积;生育结果显示,MenSCs组和MenSCs-Exos组的胚胎数量显著高于对照组;免疫组化检测结果显示,MenSCs组和MenSCs-Exos组与对照组相比,上皮细胞胞核阳性表达Ki67的数量显著增多,胞浆CK-18阳性表达量显著增加;三维成像结果显示,MenSCs-Exos移植后可迁移至再生腺体周围,MenSCs移植后可迁移至血管附近,二者均可促进子宫内膜的腺体和血管再生;Western blot的检测结果显示,MenSCs和MenSCs-Exos治疗显著提高子宫内膜容受性蛋白的表达。结论:MenSCs来源的外泌体具有损伤趋向性,可以有效修复受损内膜,增加内膜的腺体和血管形成,提高子宫内膜容受性,恢复IUA大鼠的生育能力,能够获得与MenSCs同等的治疗效果。我们的研究结果证明了MenSCs来源的外泌体在MenSCs治疗中的重要作用,为MenSCs-Exos作为一种替代MenSCs的无细胞疗法治疗IUA提供了理论基础。