目的:通过对乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中EphA8的表达的检测,并以EphA8为靶点,研究调节EphA8基因的表达对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响,在一定程度上阐明调控乳腺癌细胞侵袭迁移的分子机制,明确其在乳腺癌的发生、发展中的病理意义。方法:第一部分分析EphA8在乳腺癌中的表达及与患者预后的相关性1.收集南通大学附属医院150例乳腺癌石蜡组织标本及相应癌旁组织标本（含完整临床资料和随访结果）制备组织芯片后,用免疫组化检测肿瘤组织和癌旁组织中EphA8的表达,对比分析。2.检测EphA8的表达高低与乳腺癌患者临床病理特征的关系。3.用统计学软件分析EphA8的表达与乳腺癌的发病及患者预后的相关性。第二部分针对EphA8的shRNA抑制乳腺癌生长的体外研究1.体外培养多株乳腺癌细胞系,用qRT-PCR和WB鉴定筛选出高表达EphA8的乳腺癌细胞系。2.设计并合成4对针对EphA8的干扰靶序列,通过一部分实时定量PCR（qPCR）和免疫印迹（WB）分析这4个shRNA抑制EphA8表达的效果,筛选出沉默作用最强的一个shRNA片段。3.用脂质体转染的方法转染EphA8-shRNA至高表达EphA8的细胞株中。4.用此片段转染培养出低表达EphA8的乳腺癌细胞株,用MTT实验、transwell小室方法、划痕试验、流式细胞术、Western Blot等检测乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及 Caspase 凋亡途径相关蛋白（Caspase-3、Bax、P53、Akt、LC3B、P62）表达的变化。第三部分针对EphA8的shRNA抑制乳腺癌生长的体内研究1.将转染空质粒的control-shRNA和转染干扰质粒的EphA8-shRNA的两种细胞乳腺癌细胞系（MCF7细胞和HS-578T细胞）分别接种于裸鼠前腿腋下皮下组织内,建立裸鼠人乳腺癌皮下种植瘤模型,2.50天观察裸鼠皮下瘤成瘤情况,计算肿瘤体积。3.用统计学软件分析EphA8的表达与成瘤大小的关系。结果1.免疫组化结果显示EphA8蛋白在150例乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中存在不同程度表达。EphA8的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关,具有统计学差异（P<0.050）;Log-rank单因素生存分析表明EphA8高表达、ER高表达、Ki67增殖指数、淋巴结转移及TNM分期与术后生存时间相关（P<0.05）,而肿瘤大小、PR水平、HER2水平与术后生存无关。Kaplan-Meier生存曲线显示EphA8高表达组较低表达组5年生存率低;随着肿瘤TNM分期越高,其5年生存率越低。2.培养的 HS-578T、LCC、MDA-MB-453、MCF-7 和 MCF-10A 细胞株中,WB结果表明EPHA8蛋白在MCF-7细胞表达量最高,在MCF-10A细胞表达量最低,在HS-578T细胞表达量较低。3.根据RT-PCR和Western Blot结果筛选出沉默效率最高的shRNA3制成稳转株转染高表达的MCF-7细胞株,结果显示:紫杉醇的参与对EphA8的表达无明显影响。P53、Bax、LC3B、p62、Akt和Caspase-3表达趋势一致,EphA8敲降组表达高于正常组,而紫杉醇给药后6种蛋白表达明显升高。shRNA敲降后MCF-7细胞的侵袭及迁移能力下降,紫杉醇也明显抑制了细胞的侵袭及迁移能力。沉默EphA8后能促进MCF-7细胞的凋亡,紫杉醇给药后细胞凋亡更明显。4.根据裸鼠成瘤模型,测量裸鼠成瘤直径,观察计算离体瘤体大小、种植瘤的大体形态,结果显示:转染干扰质粒EphA8-shRNA的MCF7细胞对乳腺癌细胞的体内成瘤的生长有明显抑制作用,转染EphA8-shRNA过表达细胞株HS-578T对乳腺癌细胞的体内成瘤的生长有明显促进作用。结论:本研究首次探讨了 EphA8在乳腺癌中的表达并推测其在乳腺癌发生、发展及增殖侵袭中的关系,通过以EphA8为靶点,沉默EphA8基因对乳腺癌细胞迁移侵袭影响,在一定程度上阐明调控乳腺癌细胞侵袭迁移的分子机制,并在体内实验中验证了其对肿瘤发生发展的影响,明确其在乳腺癌的发生、发展中的病理意义,并探索基于EphA8分子作为乳腺癌生物和基因治疗潜在分子靶点的可能。