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原发性肝癌位于我国癌症死因的第二位,总体死亡率和发病率呈现上升趋势。早期肝癌诊断可以提高肝癌患者治疗效果,改善预后,是提高肝癌患者生存率的重要手段,但是传统的检测方法无法有效及准确的对肝癌进行早期诊断。本论文提出基于表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)的早期肝癌标志物的联合检测方法,并选择甲胎蛋白(Alpha Fetoprotein,AFP)与miRNA-125b作为联合检测标志物,提高诊断灵敏度与特异性,有望实现对肝癌的早期诊断,改善肝癌患者的存活率。本论文针对血清中AFP与miRNA-125b的联合、特异性、高灵敏度浓度测量,主要完成了以下工作:首先,选用基于SPR的Biacore 3000检测系统,利用其微流体系统的四通道设计,通过单通道选通修饰与四通道串联测量的有机结合,仅需单份微量患者血清样品,便可以实现其中AFP与miRNA-125b的联合定量检测。同时,通过在四通道中选择第一通道,将其设置为参考通道,消除背景光及其他环境因素的干扰。接着,选用CM5芯片,利用芯片表面的葡聚糖,通过共价键结合在芯片的金膜表面修饰AFP与miRNA-125b的生物探针,消除血清中复杂成分(例如,蛋白质、葡萄糖、激素等)的干扰,实现对AFP与miRNA-125b的特异性检测。实验中将与miRNA-125b碱基互补配对的DNA探针修饰在第二通道的传感区域,将抗AFP单克隆抗体修饰在第三通道的传感区域,实验结果表明,实现了对AFP与miRNA-125b特异性检测,但是这种直接检测法的灵敏度不高,无法满足血清中检测要求。然后,分别采用双抗夹心法和S9.6抗体增强法,提高AFP与miRNA-125b的SPR响应信号和检测灵敏度,实现血清中AFP与miRNA-125b的低浓度检测。实验结果表明,双抗夹心法能够提高AFP的检测灵敏度,可以实现临床浓度范围0-400ng/mL的精确检测;S9.6抗体增强法能够提高miRNA-125b的检测灵敏度,最小检测浓度可以达到200pM。最后,应用双抗夹心法和S9.6抗体增强法修饰的CM5芯片对AFP(0-400ng/mL)与miRNA-125b(0-1000pM)进行了联合检测实验,验证了本论文提出的联合检测方法在早期肝癌诊断中的可行性。