复痿膏治疗大鼠肺纤维化的机理探究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaobeisc
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目的:特发性肺纤维化(IPF)是一种原因不明的肺部慢性、间质性、进行性纤维化改变的疾病,死亡率极高,且其发病率也呈上升趋势。中医治疗肺纤维化有其独特优势,但目前缺乏实验证据证实。我师乔世举教授的膏方复痿膏在临床上已有不错的疗效反馈,需要进一步证实其科学性,固展开此研究,目的在于以动物实验的方式重新证实复痿膏的治疗疗效和作用机理。材料与方法:(1)分组:150只Wistar大鼠按照随机分组:空白组、模型组、泼尼松对照组、复痿膏组、复痿膏+泼尼松组。(2)造模:适应性饲养一周后,模型组和各给药组经气管灌注博来霉素5 mg/kg进行造模,空白组经气管灌注生理盐水0.1 ml/100g。(3)用药:在造模成功后第二天起空白组、模型组每日1次灌服同等容积的生理盐水;泼尼松对照组每日灌服1次6.25 mg/kg的盐酸泼尼松;复痿膏组每日灌服1次相当于10.80g生药/kg(20 m L/kg)的复痿膏;泼尼松+复痿膏组每日分别灌服1次同上剂量的泼尼松和复痿膏。(4)取材:每组大鼠分别应用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3ml/100g)后,开胸将肺组织完整取出。右肺组织于预冷的生理盐水中快速洗去血液,剔除结缔组织,放入10%福尔马林中固定,常规石蜡包埋,行染色,左肺组织在液氮中速冻后保存在-80℃冰箱。(5)指标观察与检测:观察各组肺组织,计算肺系数(肺系数=肺湿重(g)/身体重量(kg)×100%),病理切片行HE染色和Masson染色,依据其染色强度,从轻到重设定分值为0-4分。免疫组化染色图片采用Image J软件进行阳性细胞计数和灰度值分析,阳性细胞计数设定评分为0-4分,染色强度评分0-3分。RT-PCR法检测MMP-2 mRNA,TIMP-2mRNA的表达。(6)统计:用SPSS17.0统计分析软件进行统计。结果:1.大鼠一般状况:空白组大鼠状态良好;模型组精神萎靡、活动减少、呼吸急促、皮毛色泽少、摄食饮减少,大鼠整体状态较差;给药组大鼠状态较好,复痿膏+泼尼松组更明显,可见复痿膏能改善大鼠一般情况。2.肺组织情况:空白组大鼠双肺无异常。模型组大鼠双肺组织呈黯红色,有点状出血点,体积缩小、弹性较差,部分肺组织呈灰白色,表面粗糙,质地较硬,边缘不清,不易剥离。各给药组与模型组大鼠双肺病变接近只是程度稍轻,其中复痿膏+泼尼松组,大鼠双肺病变程度最轻。3.肺系数:空白组与模型组具有显著差异性(P<0.01),与泼尼松对照组比具有差异性(P<0.05);模型组相较复痿膏+泼尼松组组具有差异性(P<0.05),与复痿膏+泼尼松组比具有显著差异性(P<0.01)。4.肺泡炎程度:空白组与模型组、泼尼松对照组及复痿膏组具有显著差异性(P<0.01);模型组相较泼尼松对照组、复痿膏组无差异性(P>0.05),与复痿膏+泼尼松组具有明显差异性(P<0.01);5.肺纤维化程度:空白组与模型组、泼尼松对照组、复痿组比较具有显著差异性(P<0.01);模型组相较复痿膏组、泼尼松对照组具有差异性(P<0.05),与复痿膏+泼尼松组具有明显差异性(P<0.01);6.MMP-2的蛋白表达:空白组与模型组、泼尼松对照组具有明显差异性(P<0.01),与复痿膏组、复痿膏+泼尼松组相比具有差异性(P<0.05);模型组相较泼尼松对照组、复痿膏组具有差异性(P<0.05);与复痿膏+泼尼松组有明显差异性(P<0.01);7.TIMP-1的蛋白表达:空白组与模型组、泼尼松对照组、复痿膏组、复痿膏+泼尼松组具有明显差异性(P<0.01);模型组相较泼尼松对照组、复痿膏组具有差异性(P<0.05),与复痿膏+泼尼松组有明显差异性(P<0.01);8.MMP-2 mRNA相对表达量:与空白组相比较模型组有显著差异(P<0.01),与泼尼松对照组和复痿膏组较有差异(P<0.05),与复痿膏+泼尼松组无差异(P>0.05);与模型组相比较,泼尼松对照组、复痿膏组、复痿膏+泼尼松组都有显著差异(P<0.01);9.TIMP-1 mRNA相对表达量:与空白组相比,模型组、泼尼松对照组、复痿膏组的TIMP1 mRNA相对表达量有明显差异(P<0.01),与复痿膏+泼尼松对照组无差异(P>0.05);与模型组相比,泼尼松对照组、复痿膏组、复痿膏+泼尼松组的TIMP1 mRNA相对表达量变化显著(P<0.01);结论:1.复痿膏能有效抑制肺泡炎,延缓肺纤维化的发展,且与泼尼松联用疗效更佳。2.复痿膏能降低MMP-2蛋白和TIMP-1蛋白的表达,降低MMP-2 mRNA和TIMP-1 mRNA的相对表达。从而达到抗纤维化的效果。3.复痿膏的疗效可能是通过调节MMP-2/TIMP-1的比例,从而减少ECM沉积而达到抗纤维化的效果。
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