【摘 要】
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该论文采用液质联用(LC-MS)技术,研究开发了碘化酪蛋白甲状腺活性物质的定量和确证方法,该方法也可用于鉴别和间接测定碘化酪蛋白.首先,用氢氧化钡溶液对碘化酪蛋白进行水解,
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该论文采用液质联用(LC-MS)技术,研究开发了碘化酪蛋白甲状腺活性物质的定量和确证方法,该方法也可用于鉴别和间接测定碘化酪蛋白.首先,用氢氧化钡溶液对碘化酪蛋白进行水解,用LC-MS对水解产物中的各种碘化氨基酸进行分离和确证.实现发现碘化酪蛋白水解产物中的碘化氨基酸主要包括:一碘酪氨酸,二碘酪氨酸,二碘甲腺原氨酸,三碘甲腺原氨酸,反式三碘甲腺原氨酸和四碘甲腺原氨酸(又称甲状腺素,T<,4>).根据所得质谱图,发现各种碘化氨基酸在电喷雾电离源中特征离子的形成规律是捕获一个质子、溶剂加合、脱羧、脱氨和脱氨脱碘.并可通过m/z606与m/z652的丰度比来区分三碘甲腺原氨酸的两种异构体,进而确定四碘甲腺原氨酸作为碘化酪蛋白甲状腺活性标识化合物.然后,在定性鉴别研究的基础上,对碘化酪蛋白的水解方法和水解条件进行了优化.实验发现,氢氧化钡是最佳水解剂.当氢氧化钡浓度为18％(m/m),温度在110℃条件下,水解8~15h,四碘甲腺原氨酸得率最高.最后,建立了以四碘甲腺原氨酸为标识化合物的碘化酪蛋白甲状腺活性物质LC-MS定量方法,并对方法性能进行了考察.实验发现,用该方法测得的碘化酪蛋白中"标识化合物"的含量为1.0±0.05％.以碘化酪蛋白计算的方法线性范围为1~100mg,测定限为1mg,相对标准偏差小于10％,回收率为90~100％,并用四种商品碘化酪蛋白对方法的可靠性进行了验证.
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