氧化低密度脂蛋白对小鼠DC2.4细胞CD47及microRNA-155表达的影响

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目的观察氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对小鼠树突状细胞株DC2.4细胞形态、表型成熟、膜蛋白CD47及microRNA-155表达的影响,初步探讨CD47和microRNA-155在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)条件下在DC成熟和迁移中的潜在作用。方法1. DC2.4接种于6孔板中,用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液培养至第3天,改用无血清培养基培养并分为2组,实验组加入ox-LDL(100ug/mL),对照组加入磷酸缓冲液(PBS)。使用光学显微镜观察细胞形态学变化;分别于干预后12小时、24小时收集DC2.4细胞,采用流式细胞仪检测细胞表型(MHC-II,CD80和CD86)的表达。2. DC2.4接种于6孔板中,用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液培养至第3天,用无血清培养基培养并分为2组,实验组加入ox-LDL(100ug/mL),对照组加入磷酸缓冲液(PBS)。分别于干预后12小时、24小时收集DC2.4细胞,分别提取蛋白后采用Western blot方法测定细胞表面CD47分子的表达;提取RNA后采用荧光定量PCR方法测定DC2.4细胞中microRNA-155的表达。结果1.1DC2.4形态学观察:对照组细胞形态呈圆形或类圆形、较小、透亮,周边少量毛刺状或棘状突起;ox-LDL刺激12h及24h后观察细胞,发现细胞体积增大,胞浆逐渐丰富,呈不规则多型状态,具有典型的树突状突起。1.2DC2.4成熟表型变化:收集实验组和对照组细胞进行流式细胞检测,经过ox-LDL处理后的DC2.4表型(MHC-II,CD80和CD86)的表达明显增加,与PBS对照组相比,存在统计学差异(P<0.05)。2.1经过ox-LDL处理后的DC2.4CD47的表达下降,与PBS对照组相比,存在统计学差异(P<0.05)。2.2经过ox-LDL处理后的DC2.4microRNA-155的表达增高,与PBS对照组相比,存在统计学差异(P<0.05)。结论1.ox-LDL可使DC2.4表面类分子MHC-II,CD80和CD86高表达,诱导DC2.4成熟。2. ox-LDL可诱导DC2.4表面CD47分子下调表达、microRNA-155上调表达。
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