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猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起猪的一种高度接触性传染病,该病严重危害世界养猪业的发展,给养猪业带来巨大的经济损失。对APP毒力因子的研究是本病研究的热点和难点。本试验进行了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的ApxⅡA基因的原核表达以及其免疫原性的研究。研究内容如下：1. ApxⅡA基因的原核表达载体的构建本研究采用PCR方法成功扩增APP血清1型毒素蛋白编码基因ApxⅡA,基因大小为2871bp,将该基因序列克隆到原核表达载体pET-28a中,获得原核表达载体pET-ApxⅡ,并进行酶切鉴定和测序。结果表明,成功构建了ApxⅡA基因的原核表达载体pET-ApxⅡ。2. ApxⅡA基因表达产物免疫原性的研究将构建的原核表达载体pET-ApxⅡ经转化BL21(DE3)感受态细胞后,进行诱导表达,该重组质粒在菌液OD600达到0.8时,加IPTG至终浓度为1.0mmol/L,继续培养3h后获得良好的表达,表达产物的的大小约为110KDa,并用SDS-PAGE和western-blot进行检测,证实该基因的表达产物具有良好的反应原性。将表达的蛋白进行纯化后免疫小鼠。每次免疫后一周,利用毒素Ⅱ建立的ELISA进行抗体的检测,三免后,发现其抗体效价明显升高,证实该表达产物具有良好的免疫原性。3. ApxⅡA蛋白对小鼠的保护效力的研究将100只小鼠随机分为5组,血清1型全菌灭活苗组,血清7型全菌灭活苗组,ApxⅡA蛋白免疫组,血清7型灭活苗+ApxⅡA蛋白免疫组以及PBS对照组。每次免疫后一周,利用毒素Ⅱ建立的ELISA进行抗体的检测,第三次免疫后一周,用浓度分别为1.0×106CUF/ml和1.5×106CUF/ml的1型和7型菌株进行攻毒。结果显示：单独ApxⅡA蛋白免疫的小鼠对血清1型攻击的保护率为60%,对血清7型的保护率为50%,对同种血清型和异种血清型都有一定的免疫保护力；而血清7型灭活苗+ApxⅡA蛋白免疫组的保护率分别为70%和90%,结果表明,ApxⅡA蛋白在一定程度内能够增强灭活苗的免疫效果。