论文部分内容阅读
超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是一类由细菌质粒介导的,能水解氧亚氨基β-内酰胺类抗菌药如:头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松等三代头孢菌素和氨曲南等单环酰胺类抗菌药的β-内酰胺酶,可被β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸所抑制。ESBLs主要由革兰阴性菌,如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘质沙雷、变形杆菌等产生,是细菌对β-内酰胺类抗菌药产生耐药性的主要原因。已发现的ESBLs已经超过400多种,且新基因型种类在不断增加。按照Bradford的分类方法,ESBLs可分为TEM、CTX-M、SHV、OXA和其它五种类型。目前,随着大量抗菌药的使用,动物也出现了不同程度的耐药及多重耐药现象,其中菌株产ESBLs是耐药的重要原因之一。
本文针对40株临床分离的鸭大肠杆菌,用CLSI推荐的ESBLs初筛、确证试验方法、双纸片协同法进行ESBLs检测,用标准微量两倍稀释法及K-B纸片法检测其对抗菌药的敏感性。利用分子生物学方法对临床分离产ESBLs大肠杆菌进行基因型、基因亚型的检测。
检测结果表明,40株鸭大肠杆菌其中有18株菌产ESBLs,检出率为45%。药敏结果显示,临床分离菌株中除碳青酶烯类药物(亚胺培南)对产ESBLs菌株和非产ESBLs菌株均无影响,敏感率均为100%之外,产ESBLs大肠杆菌对其它21种抗菌药的耐药率为17%~100%,非产ESBLs的对这21种抗菌药的耐药率明显低于产ESBLs。多种抗菌药联合用药时,产ESBLs菌株MIC值均有大幅度降低。产ESBLs菌株除了对β-内酰胺类抗菌药产生耐药性外,对多种抗菌药表现出多重耐药性和交叉耐药性,例如氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素类。β-内酰胺类抗菌药与β-内酰胺酶抑制剂或其它类抗菌药联用均可明显提高产ESBLs菌对药物的抗菌活性。
18株产ESBLs大肠杆菌分别用TEM、CTX-M、SHV、OXA型四对引物进行扩增,其中861bpTEM型为18株、905bpCTX-M型为12株、831bpOXA型为9株、SHV型引物未扩增出目的片段。同时携带有TEM和CTX-M的菌株为12株,携带TEM和OXA的菌株为9株,同时携带TEM、CTX-M和OXA的菌株为3株。PCR产物经克隆后测序,结果表明,TEM型临床分离菌之间的同源性为99.8%~100%,已提交序列FJ405215与GeneBank上公布AY293072(TEM-1)序列同源性为99.9%,核苷酸序列中有两个突变点,但没有引起氨基酸位点的突变,所以仍属于TEM-1型广谱酶。CTX-M型临床分离菌之间的同源性为99.9~100%,与已提交序列FJ405218、FJ405219与GeneBank上公布AF252622(CTX-M-14)、AY156923(CTX-M-27)序列同源性为100%,所以已提交两条序列分别为CTX-M-14、CTX-M-27。OXA型临床分离菌之间的同源性为100%,已提交序列FJ841897与GeneBank上公布的EF415651(OXA-1)序列同源性为100%,故已提交序列为OXA-1型ESBLs。