论文部分内容阅读
目的:该项研究主要应用高通量的Solexa测序方法筛选出人脑卒中后认知功能障碍组(Post-stroke Cognitive Impairment,PSCI)、脑卒中后认知功能正常组(Post-stroke Cognitive Normality,PSCN)、年龄匹配对照组(Age-matched Controls,AMC)3组间显著差异表达的血清microRNAs(miRNAs),并通过实时荧光定量PCR进行验证。同时通过蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)对以上人群进行认知功能评定,以探讨这显著差异表达的miRNAs与脑卒中后认知功能障碍的相关性,从而判断其是否可为卒中后认知障碍早期诊断、早期干预的客观依据。方法:本研究招募了 PSCI组、PSCN组以及AMC组各40例,三组间年龄、性别、受教育年限、基础疾病相匹配,另外PSCI组、PSCN组间卒中类型、病灶、病程、脑卒中损伤程度相匹配。第一阶段:分别从PSCI组、PSCN组以及AMC组血清标本中,各选取5例血清标本,三组间年龄、性别、受教育年限、基础疾病相匹配,另外PSCI组、PSCN组间卒中类型、病灶、病程、脑卒中损伤程度相匹配。进行高通量的Solexa测序,初步筛选出PSCI组、PSCN组、AMC组间显著差异表达miRNAs。第二阶段:根据高通量的Solexa测序结果进行大规模、二阶段精确的定量验证,采用qRT-PCR检测三组血清中初筛选出的显著差异表达的miRNAs,并使用2-△Ct法计算其相对表达水平。为了探讨筛选的显著差异表达的miRNAs与脑卒中后认知功能障碍的相关性,本研究采用了 Spearman相关分析对血清中显著差异表达的miRNAs相对表达水平与MoCA评分进行了相关性分析。为了检验差异表达的miRNAs对脑卒中后认知功能障碍的预测价值,本研究进一步采用了 ROC(receiver operating characteristic,ROC)曲线及曲线下面积(areaundercurve,AUC)进行分析。结果:通过高通量的Solexa测序技术筛选及qRT-PCR验证过程,我们得到6个PSCI组与 PSCN 组、AMC 组间显著差异表达的血清 miRNAs:hsa-miR-191-5p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-193b-5p、hsa-miR-93-5p、miR-5991-y。其中 hsa-miR-191-5p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-93-5p、miR-5991-y 在 PSCI 患者血清中呈显著上调状态(P<0.05),hsa-miR-193b-5p在PSCI患者血清中呈显著下调状态(P<0.05)。本研究运用Spearman相关分析发现MoCA评分与血清hsa-miR-191-5p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-20b-5p、miR-5991-y、hsa-miR-93-5p 的相对表达量间存在较强正相关(P<0.05),与血清hsa-miR-193b-5p的相对表达量间存在较强负相关(P<0.05)。进一步构建ROC曲线并得到 AUC(95%CI),结果如下:hsa-miR-193b-5p、miR-5991-y、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-93-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-191-5p 的 AUC 分别为 0.905、0.817、0.751、0.741、0.650、0.642(P<0.01)。灵敏度、特异度分别为 hsa-miR-193b-5p(100%、85.7%)、miR-5991-y(77.5%、80.0%)、hsa-miR-20a-5p(63.2%、66.7%)、hsa-miR-93-5p(64.1%、62.2%)、hsa-miR-20b-5p(65.0%、57.0%)、hsa-miR-191-5p(58.5%、60.5%)。结论:1、通过高通量的Solexa测序技术的筛选及qRT-PCR验证过程,得到6个显著差异表达的血清miRNAs,其中hsa-miR-191-5p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-93-5p、miR-5991-y在PSCI患者血清中呈显著上调状态,has-miR-193b-5p在PSCI患者血清中呈显著下调状态。2、血清 hsa-miR-191-5p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-20b-5p、miR-5991-y、hsa-miR-93-5p表达水平越高,hsa-miR-193b-5p表达水平越低,提示脑卒中后发生认知功能障碍的可能性越大。3、血清miRNAs检测操作简单方便,而且无创,作为卒中后认知功能障碍早期诊断与预后的生物标志物具有潜在的应用价值。