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目的:本实验探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/Toll 样受体 4(Toll-like receptor-4,TLR4)信号通路对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化及增殖的作用机制,为以HSC作为靶标治疗非酒精性脂肪肝纤维化提供新思路。方法:HSC分4组:①空白组;②对照组;③样本组1(100ng/ml LPS)④样本组2(200ng/mlLPS),每组5个复孔,继续培养24h、48h、72h、96h,采用MTT法测定HSC存活率。另分3组:①对照组;②100ng/ml LPS组;③200ng/ml LPS组,每组各5个培养皿,再继续培养12h、24h、36h、48h,分别留取细胞提取总RNA,采用Real-Time PCR法测定 100ng/ml LPS 组第 12h、24h、36h 的 TLR4、type I collagen、MMP-13,2、TIMP-1,2、BAMBI mRNA水平;用第48h的细胞,提取蛋白质,采用蛋白免疫印迹法测定α-SMA和TLR4表达水平;另分3组:①对照组;②LPS组、③TLR4中和抗体组;采用MTT法检测各组细胞增殖情况,采用Real-Time PCR法比较各组的type I collagen和BAMBI mRNA水平。结果:1.LPS添加后HSC细胞增长非常旺盛,呈星形或多边形,体积显著增大,胞突向外伸展,胞质内脂滴显著减少甚至消失,细胞间相互融合呈局灶性或单层生长,以200ng/mlLPS组更显著。2.MTT法检测结果显示:以不同浓度加入LPS后,细胞增殖率明显增加,呈时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.01),与同期对照组相比,经LPS处理后增殖率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。加入TLR4中和抗体1mg/ml和LPS 100ng/ml后,与对照组相比,添加LPS组细胞增殖率明显升高,呈时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.01),而TLR4中和抗体组则增高不明显(P>0.05)。3.Real-Time PCR检测结果显示:经100ng/ml LPS处理后,HSC细胞的TLR4、type I collagen、MMP-13,2 和 TIMP-1mRNA 表达量与对照组相比,24h、36h明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),与LPS处理0小时比较24h、36h显著升高,差异有统计学意(P<0.01),而TIMP-2、BAMBI mRNA的表达量与对照组相比,24h、36h明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。HSC 中加入 TLR4 中和抗体(1mg/mL)和 LPS(1OOng/ml)后,与对照组相比,添加LPS组type I collagen mRNA表达量明显升高,BAMBI mRNA表达量明显降低,差异有统计学意义(p<0.01),而抗TLR4中和抗体组则无明显差异(p>0.05)。4.蛋白免疫印迹法检测结果示加入LPS的两组中TLR4、α-SMA的蛋白表达量,与对照组相比显著增高,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1.LPS刺激HSC的活化,增加TLR4的表达。2.LPS通过LPS/TLR4信号通路促进HSC的增殖及活化。3.活化的 HSC 表达 α-SMA、MMP-13,2、TIMP-1,2、type Ⅰ collagen。4.LPS通过TLR4信号通路,下调BAMBI的表达,促使HSC活化。