盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响

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目的:盐霉素(salinomycin)系聚醚酯类跨膜离子载体抗生素。从白色链丝菌培养物中分离提取。最近的研究发现,盐霉素能够杀伤乳腺癌的干细胞,而且能够抑制人的乳腺癌细胞的生长和转移。肿瘤干细胞(cancer stem cells CSC)的学说认为,肿瘤干细胞是肿瘤细胞中具有多向分化、自我更新和无限增殖能力的一部分细胞,在肿瘤的发生发展中具有重要的作用。肺腺癌侧群细胞(side population cellSP)中富含肺腺癌干细胞。干细胞转录因子Oct4属于POU转录因子家族成员之一,具有调控干细胞的特性,在干细胞中具有重要的作用。目前,盐霉素杀伤肿瘤干细胞的机制还不清楚,盐霉素对肺腺癌的影响研究亦未见报道,因此探讨不同浓度的盐霉素对肺腺癌A549细胞株侧群细胞和生物学性状产生何种影响,并据此探讨其作用的机制,有十分重要的意义。方法:无血清条件下培养肺腺癌A549细胞株的肿瘤细胞球。采用划痕实验检测不同浓度的盐霉素对肺腺癌A549细胞的体外迁移能力的影响;采用Transwell实验检测不同浓度的盐霉素对肺腺癌A549细胞的侵袭能力的影响;采用CCK8实验检测不同浓度盐霉素对肺腺癌A549细胞生存率的影响;用不同浓度的盐霉素作用于肺腺癌A549细胞株的肿瘤细胞球。流式细胞仪检测不同盐霉素浓度对肺腺癌肿瘤细胞球侧群比例的影响。Western-blot方法检测不同浓度盐霉素对肺腺癌A549细胞中干细胞转录因子Oct4蛋白表达情况的影响。结果:1把表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)加入无血清培养基对肺腺癌A549细胞进行培养,14天后可见悬浮生长肺腺癌细胞球。2应用盐霉素后的10小时其结果如下:阴性对照组迁移70微米,30ug/ml盐霉素处理组迁移40微米,60ug/ml盐霉素处理组迁移10微米。提示盐霉素能够抑制肺腺癌A549细胞的迁移能力。并且随着用药浓度的增加抑制作用加强。3应用盐霉素处理12小时后其结果如下:阴性对照组发生侵袭的细胞的数目(32.3±2.5)个/HP,30ug/ml盐霉素处理组(21.4±1.8)个/HP,60ug/ml盐霉素处理组(1.3±0.3)个/HP。提示盐霉素能够抑制肺腺癌A549细胞的侵袭。4结果显示,随着盐霉素用药浓度的增加,肺腺癌A549细胞存活的比例下降。5盐霉素处理后上机检测的结果:加入盐霉素的组别,加入60ug/ml的测得侧群的比例是3.4%,但加入30ug/ml的组别测得侧群的比例是10.5%。A未加入盐霉素组侧群的比例是12.5%,B未加入盐霉素(加入利血平)组,侧群的比例是0.7%。可以发现,随着浓度的增高,侧群的比例下降。6Western Blot结果,随着盐霉素在肺腺癌细胞用量的增加,Oct4的表达量逐渐的下降。临床标本中,肺腺癌组织有Oct4表达,正常肺组织无表达。结论:1.随着使用盐霉素浓度的增加影响肺腺癌A549细胞的侵袭、迁移能力和存活率。2.盐霉素能够减少肺腺癌A549细胞肿瘤细胞球中侧群细胞比例。3.随着使用盐霉素浓度的增加能够减少干细胞转录因子Oct4在肺腺癌A549细胞的表达。
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