中国梨和美国啤梨黑斑病菌形态和分子鉴定

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梨是我国仅次于苹果的第二大水果,也是出口量较大的水果之一,梨的出口每年都为我国创造了巨大的经济效益。我国种植的梨主要有鸭梨、雪梨、丰水梨、贡梨、香梨和早酥梨等。我国梨的产量一直居于世界首位。近年来,梨黑斑病已经成为一个国家限制另一个国家贸易的技术性壁垒,美国就曾因在我国进口鸭梨上发现据称是一个链格孢新种而两次宣布禁止从我国进口鸭梨,给我国鸭梨产业和出口企业造成巨大的经济损失,因此,极有必要弄清楚我国梨和美国梨上的链格孢种类,为打破国外技术壁垒及对梨黑斑病的防治提供理论依据。 本研究以作者从我国主要种植的6种梨和香港进口的美国啤梨上分离到的200个链格孢菌株中筛选出的37个菌株为研究对象,通过形态学特征观察、随机引物扩增多态性(RAPD)方法和ITS序列分析对这些菌株进行了研究鉴定。在形态学鉴定方面,分别应用PCA、1/2PCA、V8汁和枯草培养基等4种培养基,对供试菌株的孢子的大小、形状、颜色、喙的大小等性状进行观察,并结合产孢表型特征,对这些菌株进行了鉴定,其中对6种国产梨上的链格孢菌株鉴定为Alternaria.alternata。而对美国啤梨上的链格孢鉴定有2个种,分别为A.alternata和A.tenuissima。 进一步RAPD分析,结果表明:所有的菌株都在相关距离0.5的地方聚在一起,说明这些供试菌株之间的亲缘关系都很接近。其中大部分美国啤梨上的菌株在相关距离0.6左右的地方相聚为一类;所有供试国产梨上大部分菌株在相关距离0.75左右的地方相聚为一群,中美两国的菌株被明显的分为两个大群,说明在同一个种内,来源于不同的地理位置的链格孢在DNA多态性上也是有差异的。3种链格孢的标准菌株在相关距离0.7左右的地方相聚,说明这些标准菌株的相似性较高。在形态学上被鉴定为A.tenuissima的美国啤梨上的菌株B7单独成为一群。这些结果支持形态学观察结果。本研究采用通用引物ITS4和ITS5对供试菌株的DNA进行PCR扩增,然后进行序列测定和分析,发现它们的序列完全一样,进一步说明这些链格孢菌亲缘关系非常相近,也支持形态学鉴定结果。
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