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第一章血管性痴呆大鼠模型的制备[目的]探讨制备理想VD动物模型的方法,为进行BMSCs移植制备模型。[方法]使用Morris水迷宫对实验大鼠进行初筛,以剔除在95%参考值范围以外的SD大鼠,将筛选出的实验鼠根据随机原则分为假手术组(10只)和模型组(77只)。模型组采用改良二血管结扎法(间隔三天分次结扎双侧颈总动脉)制备VD大鼠模型,假手术组实施同样的手术操作,但是不结扎双侧颈总动脉,同等条件笼养4周后,再次行水迷宫实验,以测定两组大鼠的空间学习记忆能力变化,筛选出造模成功的VD大鼠。[结果]90只大鼠经水迷宫实验初筛后剔除3只,纳入实验87只大鼠随机分成假手术组(10只)和模型组(77只)。造模前,两组的逃避潜伏期和平台象限滞留时间差异没有统计学意义(P>0.05),造模后,两组的逃避潜伏期和平台象限滞留时间差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组由于饲养不当死亡1只,余9只；模型组大鼠因麻醉意外死亡4只,感染死亡2只,肠梗阻死亡5只,出血过多死亡2只,肺淤血死亡5只,1只出现眼球病变,3只未达痴呆标准,共制备VD大鼠模型55只,成活率为76.62%,成模率93.22%。[结论]改良二血管结扎法制备VD模型,不仅操作简易,可重复性好,而且有较高的存活率,成模率高,是较理想的制备VD模型的方法,适用于实验研究。第二章SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定[目的]应用全骨髓贴壁改良法分离培养SD大鼠BMSCs,形成稳定分离培养和扩增BMSCs的培养方法,以获得纯度高、活性好、形态均一的大鼠BMSCs,为移植治疗VD提供充足的细胞来源,保证实验顺利进行。[方法]断头处死七日龄SD乳鼠,用培养基反复冲洗股骨和胫骨,收集其骨髓,采用改良的全骨髓贴壁培养法分离、培养、纯化BMSCs,观察BMSCs的形态、生长情况并绘制细胞生长曲线,了解BMSCs的形态特征及生长特性。采用流式细胞仪测定细胞表面标志物和进行成骨诱导对BMSCs进行鉴定。[结果]光学显微镜下观察分离培养的原代BMSCs呈梭形贴壁生长。传代后细胞生长迅速,5-6天达到融合即可再次传代,细胞形态仍为梭形,鱼群样排列,集落生长呈漩涡状,第7天细胞达到饱和出现接触性抑制而生长缓慢。流式细胞仪鉴定第三代BMSCs均一表达CD29, CD90,阳性率分别为99%,99.6%；几乎不表达CD34, CD45,阳性率分别为0.169%,1.19%。对BMSCs进行成骨诱导后行茜素红染色,钙结节呈深红色。[结论]SD大鼠的BMSCs能在体外分离、培养和纯化。全骨髓贴壁改良培养法能稳定分离培养和扩增BMSCs,获得纯度高、活性好、形态均一的大鼠BMSCs,可提供充足的实验细胞来源。第三章甘露醇对骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠效果观察[目的]比较直接移植BMSCs与甘露醇预处理后再进行BMSCs移植的VD大鼠模型的行为学改变,海马CA1区Nogo蛋白及其受体表达量的变化,探讨甘露醇对静脉移植BMSCs治疗VD大鼠模型疗效的影响及机制。[方法]造模成功的VD大鼠随机分为五组,①模型对照组8只(不进行任何处理),②甘露醇组10只(尾静脉注射37℃、20%甘露醇溶液,1.5g/kg),③培养基组10只(尾静脉注射1m工无血清低糖培养基),④BMSCs组13只(尾静脉注射细胞浓度为1×106个/ml的第三代BMSCs)⑤甘露醇预处理BMSCs组14只(尾静脉注射37℃、20%甘露醇溶液,1.5g/kg,10-20min后,注射细胞浓度为1×108个/m1的第三代BMSCs),此外设立假手术组9只。同等条件下笼养4周后,行水迷宫实验检测各组大鼠的空间学习记忆能力,使用免疫组化检测各组大鼠海马CA1区的Nogo A蛋白及其受体表达水平的变化。[结果]BMSCs组与模型对照组、甘露醇组、培养基组比较,逃避潜伏期缩短,平台象限滞留时间延长,差异具有统计学意义(P<0.05)；甘露醇预处理BMSCs组的逃避潜伏期比BMSCs组明显缩短,其平台象限滞留时间也比BMSCs组显著延长,差异均具有统计学意义(P<0.05),尚未达到假手术组的水平。但是,甘露醇预处理BMSCs组与假手术组第3-5天的逃避潜伏期比较,差异没有统计学意义(P>0.05),两组的平台象限滞留时间比较,差异也没有统计学意义(P>0.05)。BMSCs组海马CA1区Nogo A蛋白及其受体免疫组化阳性产物比模型对照组、甘露醇组、培养基组表达量少,染色浅；甘露醇预处理BMSCs组的Nogo A蛋白及其受体染色不但比模型对照组、甘露醇组、培养基组浅,而且也比BMSCs组浅,阳性产物也较少,但染色的深度及面积超过假手术组。[结论]尾静脉注射移植第三代BMSCs能够改善VD大鼠的空间学习记忆能力。经过甘露醇预处理后再行尾静脉注射移植BMSCs使VD大鼠的空间学习记忆能力改善效果优于单独注射BMSCs的VD大鼠。其机制可能是甘露醇提高血脑屏障对BMSCs及各种脑营养因子的通透率,进而增加VD大鼠脑内各种脑营养因子的表达水平,减低Nogo蛋白信号系统对突触生长的抑制作用,从而促进神经功能恢复。