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目的:
检测非小细胞肺癌(NSCLC)和癌周正常肺组织中AQP1、3、5的表达,分析AQPs与肿瘤细胞生长、侵袭、转移的关系,以期为NSCLC的诊治找到新的靶点。
方法:
取自温州医学院附属第一医院2007年5月~2008年5月经手术切除且临床资料完整的经病理证实NSCLC病例共56例,其中肺鳞癌20例,肺腺癌36例;以及癌周正常肺组织(距癌缘>3cm,病理证实无肿瘤细胞)17例,肺腺癌胸膜转移组织11例。所有入选研究对象均无肺部其他疾病,无其他器官组织恶性肿瘤,术前均未行放疗、化疗及中草药等针对NSCLC的治疗。采用免疫组化Elivision二步法及原位杂交技术对非小细胞肺癌组织、癌周正常肺组织、腺癌胸膜转移组织在蛋白水平和基因水平上AQP1、3、5的表达进行评价验证,并分析与临床病理之间的关系。以400倍光镜下阳性切片累积光密度(IOD)值为统计数据,所有数据应用SPSS12.0软件统计分析,统计结果以P<0.05作为差异有统计学意义,以P<0.01作为差异有显著统计学意义。
结果:
(1)正常肺组织中有AQP1、3、5表达:AQP1主要分布于气道和肺的毛细血管内皮细胞,气道粘膜柱状上皮细胞基底膜和大气道粘液腺分泌细胞基底膜;AQP3分布于肺泡Ⅱ型上皮细胞、气道粘膜柱状上皮细胞胞浆和顶膜及部分粘液腺细胞基底膜;AQP5分布于Ⅰ型肺泡细胞项膜、气道粘膜上皮的柱状上皮细胞胞浆和项膜、气道粘液腺分泌细胞顶膜和部分基底膜。蛋白与mRNA的表达存在相关性。
(2)肺鳞癌细胞内仅有AQP3表达,而未见AQP1、AQP5的表达,但在鳞癌细胞团周边的微血管内皮上有丰富AQP1表达;鳞癌组织与癌周正常肺组织AQP1比较未见差异(P=0.389),但AQP3表达有显著差异(P=0.003)。肺腺癌细胞内AQP1、3、5均有丰富表达,癌细胞团附近的微血管内皮细胞亦有AQP1表达;肺腺癌组织中AQP1、3、5的表达均显著高于癌周正常肺组织(均P<0.003)。比较肺鳞癌和肺腺癌间,腺癌AQP1表达高于鳞癌(P=0.01),而AQP3的表达两者无差异(P=0.999);在肺腺癌胸膜转移灶中,可见腺癌细胞中较弱的AQP3和AQP5表达,未见有AQP1表达,但在腺癌细胞周围的微血管内皮仍见有较丰富AQP1的表达。
(3)AQP1、3、5蛋白与mRNA在同一组织中表达的相关性检验显示,只有在肺腺癌组织中AQP1和AQP5在蛋白水平和基因水平的表达存在正相关,相关系数r=0.837,P<0.01和r=0.779,P<0.01;而在其它组织中各水通道蛋白间均未见有相关性。
(4)两两比较结果显示:AQP1蛋白和mRNA在癌周正常肺组织和肺腺癌,肺鳞癌和腺癌,肺腺癌和腺癌胸膜转移灶组织间存在差异,差异有显著统计学意义;AQP3蛋白和mRNA在癌周正常肺组织和肺鳞癌、腺癌、腺癌胸膜转移灶,肺腺癌和腺癌胸膜转移灶组织间存在差异,有统计学意义,但在肺鳞癌和腺癌间未见有差异,P=0.999;AQP5蛋白和mRNA在癌周正常肺组织和肺腺癌、腺癌胸膜转移灶,肺腺癌和腺癌胸膜转移灶组织间都存在差异,差异有显著统计学意义。
(5)肺鳞癌中AQP1的表达与年龄、性别、TNM分期无相关性,与肺鳞癌肿瘤细胞分化程度负相关,与淋巴结转移正相关;AQP3与年龄、性别不相关,与细胞分化程度负相关,与淋巴结转移、TNM分期正相关。肺腺癌中AQP1、5与年龄、性别无相关性,与细胞分化程度负相关,与淋巴结转移、TNM分期正相关;AQP3与年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期均无相关性,但与细胞分化程度负相关。
结论:
NSCLC组织中癌细胞AQPs表达显著高于癌周正常肺组织,且不同病理类型表达不同,肺鳞癌细胞只表达AQP3,肺腺癌细胞表达AQP1、3、5,其表达与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关,认为AQPs在NSCLC的生长、血管生成,尤其是远处转移中起重要促进作用;提示以水通道蛋白为干预靶点来抑制NSCLC组织中AQPs的高表达可能减弱癌细胞的增殖浸润及转移。