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本文的研究对象是厚壳贻贝中提取得到的水溶性多糖,以酶提取法取代传统的热水提取法,进行多糖提取,并对提取条件进行了优化。此外,对粗多糖进行了分离纯化、基本理化性质、体外抗氧化活性、细胞水平的抗肿瘤能力等方面进行评价。主要研究成果如下:1.多糖提取工艺的优化本文分别进行了木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的单因素试验,并采用正交试验进行优化,主要考察了加酶量、提取的时间和温度以及p H等因素对多糖提取率的影响,然后通过正交优化得到最佳提取条件,最后进行两步联合酶提法。比较三种酶提法的提取率后确定最优提取方案,单一酶提取的最佳提取条件分别为:木瓜蛋白酶为加酶量:0.5%,提取时间:4h,提取温度:40℃,p H:7;胰蛋白酶加酶量:0.7%,提取时间:4h,提取温度:40℃,p H:9。提取率分别为:木瓜蛋白酶提法最佳提取率为5.02%;胰蛋白酶法最佳提取率为5.38%;而两步联合酶解法提取率为6.02%。结果表明:联合酶提法的提取率略高于单一酶提法。2.粗多糖的分离纯化及理化性质测定粗多糖依次通过Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephacryl S-300 High Resolution凝胶柱进行分离纯化,得到4个组分MT0、MT0.1-1、MT0.1-2、MT1.2。对4个组分进行了多种理化性质的测定:包括总糖含量、蛋白质含量、氨基糖含量、糖醛酸含量等,总糖含量结果依次为:61.00%、62.47%、62.25、39.23%;蛋白含量依次为:0、0、0、1.15%;氨基糖含量分别为0.24%、0.42%、0.24%以及1.64%;而糖醛酸含量分别为16.15%、20%、11.83%和8.8%。此外,还对4种多糖结构进行了红外分析,红外结果显示:MT1.2与其它三种多糖在结构上存在较大差异,MT0、MT0.1-1、MT0.1-2初步断定为α-D-葡萄吡喃糖,而MT1.2初步分析为B-呋喃糖。3.抗氧化和抗肿瘤的体外活性评价主要进行了酶提粗多糖体外抗氧化活性以及MT0、MT0.1-1、MT0.1-2和MT1.2体外抗肿瘤活性的测定。粗多糖体外抗氧化包括DPPH的清除、羟基自由基的清除、超氧阴离子的清除以及还原力的测定。体外抗氧化的数据显示,随着样品浓度增加,抗氧化活性依次递增,但与阳性对照Vc存在较大差距。当样品浓度为3mg/m L时,样品清除率依次为63.20%、19.60%、27.00%,还原力为0.231。体外抗肿瘤主要采用MTT法来检测多糖对肿瘤细胞SPC-A-1和DU-145的抑制率,并采用HE染色和ELISA实验从形态上以及细胞因子两方面阐述了厚壳贻贝多糖的抗肿瘤活性。MTT实验结果表明:多糖的体外抗肿瘤活性与作用浓度和作用时间呈正相关性,当多糖浓度为2mg/m L,作用时间为60h时,MT0对SPC-A-1和DU-145细胞的抑制率分别为20.15%和26.53%;MT0.1-1的抑制率分别为28.95%和24.92%;MT0.1-2的抑制率则为25%和30.14%;MT1.2的抑制率分别为30.87%和34.80%,实验数据可以看出:MT1.2的抑制效果优于其它三者,但低浓度多糖作用下,作用时间对抑制率的影响并不是很大。HE染色结果显示:经多糖处理后的凋亡的DU-145和SPC-A-1细胞的形态发生了明显变化;ELISA实验表明:经多糖处理后的肿瘤细胞培养液中IL-6和IL-10两种细胞因子的含量均有所下降。