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目的: 为确证贵州苗药“消疤草”预防肝纤维化功效,并探讨其可能的作用机理。 方法: Wistar大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组、阳性药物(扶正化瘀胶囊0.525 g.kg-1)对照组,“消疤草”(Xiaobacao,XBC)高、中、低剂量组(“消疤草”煎液原液、1/5原液、1/10原液),每组15只。除正常对照组外,各组予30%乙醇灌胃、猪血清腹腔注射、40%CCl4葵花籽油溶液皮下注射,及喂饲高脂饲料制造复合因素肝纤维化模型;实验药物配成一定浓度,于造模当天开始按1ml/100g体质量进行灌胃预防肝纤维化,每日1次,连续8周,正常对照组与模型组大鼠每日予等体积的蒸馏水灌胃。实验结束后,取股动脉血用自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(Albumin,ALB);HE染色、Masson染色观察肝脏病理变化;ELISA法检测血清基质金属蛋白酶-13(Matrix Metalloproteinase-13,MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue Inhibitor of Matrixmetalloproteinase-1,TIMP-1);免疫组化法检测肝组织Ⅰ型胶原(Cllagean-Ⅰ,Col-Ⅰ)、转化生长因子-β1(Transfomling Gmwth Factor-beta1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SmoothMuscle Actin,α-SMA);实时荧光定量PCR技术(Real time PCR,RT-PCR)检测肝组织TGF-β1;Western blot检测肝组织Smad3、Smad7蛋白。 结果: ①与各实验组相比,模型组ALT、AST偏高,ALB偏低(P<0.05),扶正化瘀组AST高于XBC中剂量组(P<0.05),XBC各剂量之间ALT、AST、ALB含量差异无统计学意义。 ②模型组血清中MMP-13低于扶正化瘀组及各实验药物组,且XBC高剂量组明显高于扶正化瘀组与低剂量组(P<0.05)。TIMP-1的结果则在正常对照组中水平最低,模型组水平最高(P<0.05),扶正化瘀组与XBC各组相比较差异无意义,但 XBC高、低剂量组间差异显著(P<0.05)。 ③HE染色、Masson染色结果示正常对照组大鼠肝脏未见明显异常。模型组大鼠可见典型的肝纤维化、肝硬化形成,扶正化瘀组、XBC高、中剂量组同模型组相比,肝脏炎症程度减轻(P<0.05),三组间无显著差异;测定胶原面积比提示模型组明显高于其他组(P<0.05),扶正化瘀组的面积比值低于XBC干预组(P<0.05);而XBC高剂量组胶原面积比值明显低于中、低剂量组(P<0.05)。 ④免疫组化结果提示Col-Ⅰ、TGF-β1、α-SMA在正常对照组为弱阳性表达或几乎不表达,平均光密度值(Average Optical Density,AOD)显著低于其他组(P<0.05);模型组为强阳性表达,AOD最高,与其他各组比较差异具有统计学意义(P<0.05),扶正化瘀组与XBC高、中、低剂量组可见阳性细胞数目显著减少,胞质染色较浅,AOD居于正常对照组与模型组之间;扶正化瘀组与XBC高、中、低剂量组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05),XBC煎液的各剂量组中,以高和(或)中剂量组降低最明显。 ⑤RT-PCR示TGF-β1mRNA在正常对照组比其他各组表达水平低下(P<0.05),模型组肝组织中TGF-β1mRNA大量表达,与扶正化瘀组及XBC高、中、低剂量组比较差异显著(P<0.05);扶正化瘀组与XBC高、中、低剂量组间表达差异无统计学意义。 ⑥模型组大鼠肝组织Smad3蛋白表达明显增强,Smad7蛋白表达明显减少;与模型组比较,扶正化瘀组与XBC各组的Smad3的表达量降低、Smad7的表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05);XBC高剂量组与中、低剂量组之间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论: “消疤草”具有预防肝纤维化形成的作用,可能是通过抑制肝脏炎症及下调 Smad3、上调Smad7表达,阻断 TGF-β1表达信号通路,抑制肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)的活化,增加血清MMP-13的水平,降低TIMP-1水平,改善MMP-13/TIMP-1比值的不平衡,促进细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的降解发挥预防肝纤维化作用。