由于生殖器官的病变或生殖细胞的生长状态问题导致的生殖疾病在当今社会变得越来越严重。随着生殖干细胞的诱导及培养技术的成熟,使得干细胞移植成为其中一种治疗方法。但尚无理想的动物模型用来评价生殖细胞的移植效果。本课题组通过原核注射的方法获得昆明系转pSohlh2-Tet3G-TRE 3G-Flag-DTA转基因小鼠。在启动子Sohlh2的作用下通过强力霉素（Dox）诱导Tet-on系统表达白喉毒素A（DTA）,从而能够达到特异性的去除生殖细胞的效果。得到实验组高凤磊制备的转基因小鼠以后,我进行了转基因小鼠的效果评估。首先,通过近交的方法提高纯合子转基因小鼠的概率,然后用野生型昆明小鼠进行测交,检测后代转基因率;获得三只纯合的转基因小鼠。其次,通过Genome Walking技术确定外源基因插入到四号染色体AC₀00026位置。第三,药物诱导及效果检测。前期摸索进行了腹腔注射、饮水、直肠吸收等给药方法,经比较发现,在母鼠怀孕期开始饮水给药,直到后代小鼠长大,生殖细胞去除效果最佳,给药浓度为2mg/mL。平行对照试验为野生型昆明怀孕母鼠。诱导十周后,取后代小鼠睾丸卵巢,通过western blot的方法检测组织中rtTA蛋白的表达,通过冰冻切片做DTA和rtTA两个基因的原位杂交实验。使用4%多聚甲醛固定后做石蜡切片对比诱导前后形态学上的变化。Dox诱导后转基因小鼠的卵巢和睾丸中均可检测到目的蛋白rtTA表达。原位杂交实验的结果表明目的基因主要是在曲精细管基膜周围细胞中表达。形态学上,转基因小鼠Dox诱导后的生殖细胞显著减少,但野生型小鼠生殖细胞变化不明显。结果表明转基因小鼠经过四环素累药物Dox诱导后,精原干细胞有被杀伤和去除的效果。最后,取3-5天的C57雄性乳鼠制备精原干细胞,对转基因去除模型雄性小鼠睾丸进行C57精原干细胞移植,移植对照组为以白消安去除生殖细胞的昆明雄性小鼠。结果表明,注射C57精原干细胞的睾丸官腔细胞数目显著增加,转基因药物诱导小鼠的实验效果与注射白消安组的实验效果相似。综上所述:通过近交筛选,获得了稳定遗传的纯合转基因小鼠。通过Genome Walking技术检测证明外源目的基因整合在小鼠基因组的四号染色体上。通过采用转基因小鼠怀孕以后开始给药的方法在后代雄性小鼠睾丸中出现了明显的生殖细胞去除的现象,移植C57精原干细胞后形态学上观察到恢复,为之后的深入研究奠定了基础。