【摘 要】
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目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,探讨RNA干扰沉默fascin基因的表达对人胆管癌细胞QBC939体外增殖和凋亡的影响。方法采用常规方法进行QBC939细胞的培养,将其分为三组,实验组转
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目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,探讨RNA干扰沉默fascin基因的表达对人胆管癌细胞QBC939体外增殖和凋亡的影响。方法采用常规方法进行QBC939细胞的培养,将其分为三组,实验组转染fascin-shRNA慢病毒载体,非特异性对照组转染shRNA阴性对照慢病毒载体,而空白对照组予以等量PBS缓冲液处理。RT-PCR及Western blot检测各组中fascin mRNA水平和蛋白水平的表达情况;通过流式细胞术PI单染检测细胞周期,Annexin V和PI双染检测细胞凋亡。结果1、Western blot检测发现,实验组中fascin基因的蛋白水平表达明显低于空白对照组及非特异性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2、RT-PCR检测发现,实验组fascin基因的mRNA水平表达明显低于空白对照组及非特异性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3、PI单染检测细胞周期发现实验组细胞在G1期所占比例明显高于空白对照组及非特异性对照对照组,差异有统计学意义(p<0.05),并在实验组中可见凋亡峰,凋亡率明显高于其余两组,差异有统计学意义(p<0.05);4、Annexin V和PI双染检测细胞凋亡发现实验组中凋亡率明显高于非特异性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论1、慢病毒介导的shRNA能有效地沉默Fascin基因在胆管癌QBC939中的表达;2、沉默fascin基因在胆管癌QBC939中的表达抑制了肿瘤的增殖;3、沉默fascin基因在胆管癌QBC939中的表达诱导了肿瘤的凋亡。
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