论文部分内容阅读
目的 应用生物信息学平台对胃癌相关基因表达片段进行筛选、克隆及序列的生物特征分析和蛋白预测。以期寻找和发现新的胃癌发生过程中的相关基因,为探讨胃癌发生的分子机制及其基因水平的诊断和治疗提供标志和依据。 方法 选用人胃癌、癌前病变及正常胃黏膜组织经差异显示逆转录PCR所获得的9条差异表达片段,通过BLAST工具中的BLASTn搜索NCBI上EST和nr数据库,对所获得的差异表达序列进行筛选,结合Northern杂交印证等分子生物学技术分析序列的真实性;利用人类基因组染色体、Unigene、SAGE等数据库分析与已知基因同源EST序列的特征;5′RACE方法扩增与数据库已收录基因无同源性的EST全长cDNA,分析开放读框,利用NCBI、EMBL提供的公共数据库资源分析其编码氨基酸的生物学特征以及预测其编码蛋白的功能。 结果 9条差异显示的EST序列经过筛选,结果显示3条序列与已知基因高度同源,6条无高度同源的序列。3条与已知基因高度同源序列中:1条序列与UniGene数据库Hs.387579的人CD9抗原同源,染色体定位于12p13.3,在胃癌组织中表达下调;1条序列与UniGene数据库Hs.387905的人血影蛋白SPTAN1同源,染色体定位于9q33-34,在胃癌组织中表达上调;1条序列与UniGene数据库Hs.356794的人核糖体蛋白S24同源,定位于多条染色体上,在胃癌组织中表达上调。6条无高度同源的序列中,对其1条利用5′RACE扩增得到EST的全长cDNA,核酸序列分析结果显示含有一个363bp完整读码框,编码120个氨基酸,将该序列命名为gcI。gcI定位于染色体10q21-22天津医科大学硕士学位论文区域,其SAGE图谱标签在4个SAGE库中有不同表达。氨基酸序列分析显示gcJ含有2个跨膜区,预测定位于胞膜;经BlastP搜索工具与蛋白数据库比对没有发现同源序列;功能位点分析含有3个蛋白激酶C磷酸化位点和3个N端豆范酞化作用位点。其它5条EST序列的功能分析和验证将在后续研究工作中进行。小结利用生物信息学方法对胃癌差异显示序列进行筛选,获得三条与已知基因同源EST序列,分别与人类抗原 CDg外显子8、QH血影蛋白、人核糖体蛋白RPS24同源。经电子表达谱分析,这三条序列均在体内多种细胞系中广泛分布。筛选获得六条与己知基因同源无同源性序列,对其中一条经RACE方法延伸获得。DNA全长,编码120个氨基酸,命名为gcl,其编码蛋白相关数据库尚未收录,对其进行综合的生物信息学方法分析,推测901可能编码一个跨膜性质的与信号转导有关的蛋白,可能是参与胃癌的发生过程中的一个相关基因。其它5条EST序列的功能分析和验证将在后续研究工作中进行。